bac

THSEEn vue de l'obtention du

DOCTORAT DE LUNIVERSIT DE TOULOUSEDlivr par lInstitut National Polytechnique de Toulouse Discipline ou spcialit : Sciences des Agroressources

Prsente et soutenue par Chaker EL KALAMOUNI Le 13 Dcembre 2010

Caractrisations chimiques et biologiques dextraits de plantes aromatiques oublies de Midi-Pyrnes

JURYMme. Isabelle FOURAST M. Brahim MARZOUK Mme. Chantal MENUT Mme. Christine RAYNAUD M. Thierry TALOU M. Roland VEHR M.P.Rimantas VENSKUTONIS Professeur, Universit de Toulouse III Professeur, Centre de Biotechnologie, Tunisie Professeur, Universit Montpellier II Ingnieur de recherche, INP de Toulouse Ingnieur de recherche, INP de Toulouse Professeur, Ghent University, Belgique Professeur, Kaunas Univ of Technology, Lituanie Prsident Rapporteur Rapporteur Membre Membre Membre Membre

Ecole doctorale : Sciences de la Matire Unit de Recherche : Laboratoire de Chimie Agro-Industrielle Directeurs de Thse : Thierry TALOU et Christine RAYNAUD

A la mmoire de ma grand mre que dieu repose son me en paix A mes parents que dieu protge En tmoignage de ma profonde affection. Quils sachent que ce travail est en partie le fruit de leur soutien ; je leur suis trs reconnaissant. Leur fiert mon gard aujourdhui est pour moi la meilleure des rcompenses A Salma mon pouse qui ma toujours encourag

Madame Elisabeth BORREDON, je vous remercie pour votre accueil chaleureux au sein de votre laboratoire de recherche. Christine, merci pour votre disponibilit tout au long de ma thse et pour tout ce que vous mavez appris en chimie analytique notamment sur techniques chromatographiques. Merci de mavoir consacr du temps pour corriger ma thse, Vous mavez guid pendant ces quatre annes et clair sur les voies les plus intressantes prendre. Ce travail naurait pas t le mme sans votre encadrement. Thierry, merci de mavoir encourag afin de prendre des dcisions importantes dans ma vie professionnelle. Merci de mavoir fait autant voyager durant ma thse, Autriche, Lituanie et Grce et de mavoir fait participer des congrs internationaux, cela ma permis dchanger sur mes travaux de recherche. Jai apprci beaucoup votre amiti, votre dynamisme et votre bonne humeur tout au long de ma thse. Je tiens remercier le Professeur Rimantas VENSKUTONIS, de mavoir accueilli au sein de son laboratoire en Lituanie pour effectuer une bonne partie de ce travail. Je le remercie vivement pour sa collaboration et sa prsence parmi les jurys. Je remercie Professeur Isabelle FOURAST pour son aide botanique, et pour les sorties que nous avons effectu ensemble pour ramasser les plantes. Je la remercie pour sa prsence parmi les jurys. Je remercie Madame Chantal MENUT Professeur lUniversit de Montpellier, qui a bien voulu examiner ce manuscrit et juger ce travail. Je remercie Monsieur Brahim MARZOUK Professeur au centre de Biotechnologie de Borj-cdria en Tunisie, qui a bien voulu examiner ce manuscrit et pour sa prsence parmi les jurys. Je remercie Madame An ADAMS Professeur lUniversit de Gand, davoir accept notre invitation pour participer ce jury de thse.

Merci Graldine GIACINTI pour sa patience et ses conseils concernant la partie analytique. Jai beaucoup apprci sa disponibilit et ses conseils aviss. Merci Laure CANDY de mavoir aid durant les moments difficiles Je tiens remercier lensemble du personnel du laboratoire pour leur convivialit, Mireille, Isabelle, Karine, Marie-Christine, Emmanuelle, Didier et Anne pour leur disponibilit. Aux autres doctorants et collgues, bon courage pour la suite Merci mes proches notamment mes parents, ma belle famille, mes deux surs Abir et Stphanie, mes deux frres Nasser et Omar Sans vous, rien naurait possible, merci de votre soutien moral et de votre amour Enfin mes remerciements sont particulirement adresss Salma, mon pouse, qui est la personne la plus importante mon cur, de mavoir soutenu et patiemment rconfort et encourag durant ces quatre annes, qui ne pourront que rester inoubliables pour nous.

Caractrisations chimiques et biologiques dextraits de plantes aromatiques oublies de Midi-Pyrnes

Table des matiresINTRODUCTION GENERALE .........................................................................................2 CHAPITRE I ........................................................................................................................5 ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE ...........................................................................................5Introduction........................................................................................................................................................... 7 I . Plantes aromatiques mdivales de la rgion de Midi-Pyrnes .................................................................. 9 I.1 . Historique.................................................................................................................................................... 9 I.2 . Les Milieux relictuels.................................................................................................................................. 9 I.3 . Notion de raret..........................................................................................................................................10 I.4 . Distribution botanique et mondiale des plantes aromatiques mdivales. .................................................10 I.4.1 . Famille des Astraces : morphologie, date dintroduction et distribution. .......................................10 I.4.2 . Famille des Lamiace : morphologie, date dintroduction et distribution ..........................................11 I.4.3 . Famille des Apiaces : morphologie, date dintroduction et distribution...........................................11 I.5 . Dmarche bibliographique de slection des plantes...................................................................................12 II . Etude bibliographique des cinq plantes aromatiques mdivales slectionnes.......................................22 II.1 . Achillea millefolium : informations botaniques, structurales et culturales................................................22 II.1.1 . Noms et origine.................................................................................................................................23 II.1.2 . Distribution nationale........................................................................................................................23 II.1.3 . Usage tonique stomachique ..............................................................................................................23 II.1.4 . Usage hmostatique ..........................................................................................................................24 II.1.5 . Usage emmnagogue ........................................................................................................................24 II.1.6 . Autres usages ....................................................................................................................................24 II.1.7 . Proprits physicochimiques et biologiques .....................................................................................25 II.2 . Tanacetum balsamita : informations botaniques, structurales et culturales..............................................26 II.2.1 . Noms et origine.................................................................................................................................27 II.2.2 . Distribution nationale........................................................................................................................27 II.2.3 . Diverses proprits............................................................................................................................27 II.2.4 . Usage pharmacologique....................................................................................................................28 II.2.5 . Usages divers ....................................................................................................................................28 II.2.6 . Cultures.............................................................................................................................................29 II.2.7 . Proprits physicochimiques et biologiques .....................................................................................29 II.3 . Calamintha grandiflora : informations botaniques, structurales et culturales ..........................................32 II.3.1 . Noms et origine................................................................................................................................33 II.3.2 . Distribution nationale........................................................................................................................33 II.3.3 . Historique de la dcouverte du Th dAubrac dans les Pyrnes .....................................................34 II.3.4 . Ecologie ............................................................................................................................................34 II.3.5 . Proprits physicochimiques et biologiques .....................................................................................35 II.4 . Myrrhis odorata : informations botaniques, structurales et culturales......................................................36 II.4.1 . Noms et origine.................................................................................................................................37 II.4.2 . Distribution nationale........................................................................................................................37 II.4.3 . Diverses proprits............................................................................................................................38 II.4.4 . Usages divers ....................................................................................................................................38 II.4.5 . Proprits physicochimiques et biologiques .....................................................................................38 II.5 . Monarda didyma : informations botaniques, structurales et culturales ....................................................40 II.5.1 . Noms et origine.................................................................................................................................41 II.5.2 . Distribution nationale........................................................................................................................41 II.5.3 . Diverses proprits............................................................................................................................41 II.5.4 . Usages divers ....................................................................................................................................41 II.5.5 . Proprits physicochimiques et biologiques .....................................................................................42

Caractrisations chimiques et biologiques dextraits de plantes aromatiques oublies de Midi-PyrnesIII . Techniques dextraction des fractions volatiles .........................................................................................43 III.1 . Techniques dextraction des huiles essentielles ......................................................................................43 III.1.1 . Hydrodistillation..............................................................................................................................43 III.1.2 . Hydrodistillation-extraction simultane ..........................................................................................44 III.2 . Techniques dextraction des composs organiques volatils (COV) .......................................................45 III.2.1 . Espace de tte statique (atmosphre confine) ................................................................................45 III.2.2 . Espace de tte dynamique................................................................................................................46 III.2.3 . Espace de tte pseudo-dynamique ...................................................................................................46 IV . Composition chimique des plantes aromatiques ........................................................................................47 IV.1 . Fraction volatile des plantes aromatiques ...............................................................................................48 IV.1.1 . Localisation et structure histologique des huiles essentielles ..........................................................49 IV.1.2 . Phnomnes physico-chimiques et facteurs produisant laltration des huiles essentielles ............50 V . Mthodes didentification chimique des huiles essentielles ........................................................................51 V.1 . Chromatographie en phase gazeuse monodimensionnelle .......................................................................52 V.2 . Chromatographie en phase gazeuse couple lolfactomtrie (CPG/O)..................................................52 V.3 . Chromatographie en phase gazeuse deux dimensions ...........................................................................53 V.3.1 . Chromatographie deux dimensions heart-cutting CPG/SM ...........................................................53 V.3.2 . Chromatographie totale CPG-2D......................................................................................................54 VI . Activits biologiques des plantes aromatiques ...........................................................................................54 VI.1 . Gnralits ..............................................................................................................................................54 VI.2 . Technique dextraction des antioxydants ................................................................................................56 VI.3 . Activits antioxydantes des plantes aromatiques : huiles essentielles, extraits aromatiques...................56 VI.3.1 . Oxydation et auto oxydation ...........................................................................................................56 VI.3.2 . Les antioxydants..............................................................................................................................58 VI.3.3 . Division des antioxydants par rapport leur mcanisme daction ..................................................59 VI.3.4 . Division des antioxydants suivant la nature chimique (naturel et synthtique)...............................60 VII . Mthodes dvaluation de lactivit antioxydante ....................................................................................63 VII.1 . Gnralits .............................................................................................................................................63 VII.2 . Quelques mthodes dvaluation de lactivit antioxydante..................................................................64 VIII . Huiles essentielles comme agents antimicrobiens ...................................................................................69 VIII.1 . Gnralits............................................................................................................................................69 VIII.2 . Mode daction contre les bactries .......................................................................................................70 IX . Mthode dvaluation de lactivit antibactrienne...................................................................................70 IX.1 . Technique en milieu solide (mthode de la diffusion en disque) ............................................................70 IX.2 . Technique en milieu liquide (mthode de dilution) ................................................................................71 IX.2.1 . La dilution en bouillon ....................................................................................................................71 IX.2.2 . La dilution en glose .......................................................................................................................71

CHAPITRE II.....................................................................................................................72 CARACTERISATION DES COMPOSES ORGANIQUES VOLATILS DE CINQ PLANTES AROMATIQUES MEDIEVALES ; EVALUATION DE LACTIVITE BIOLOGIQUE DES HUILES ESSENTIELLES ET DES RESIDUS DHYDRODISTILLATION ..............................................................................................72Rsum ..................................................................................................................................................................74 Introduction..........................................................................................................................................................75 I . Composition chimique des huiles essentielles................................................................................................76 I.1 . Achillea millefolium : caractrisation de la fraction volatile des parties ariennes ....................................76

Caractrisations chimiques et biologiques dextraits de plantes aromatiques oublies de Midi-PyrnesEtude cintique de lextraction par hydrodistillation dAchillea millefolium ....................................................76 I.1.1 . Composition chimique de lhuile essentielle dAchillea millefolium et discussion............................77 I.2 . Calamintha grandiflora : caractrisation des extraits des tiges et des feuilles...........................................82 I.2.1 . Composition chimique de lhuile essentielle de Calamintha grandiflora et discussion.....................82 I.3 . Tanacetum balsamita : caractrisation des extraits des tiges et des feuilles ..............................................85 I.3.1 . Composition chimique de lhuile essentielle de Tanacetum balsamita et discussion ........................86 I.4 . Myrrhis odorata : caractrisation chimique des tiges et des feuilles .........................................................93 I.4.1 . Composition chimique de lhuile essentielle de Myrrhis odorata et discussion ................................93 I.5 . Monarda didyma : caractrisation chimique des tiges et des feuilles ........................................................96 I.5.1 . Composition chimique de lhuile essentielle de Monarda didyma et discussion ..............................96 II . Caractrisation sensorielle des huiles essentielles des cinq plantes aromatiques : Achillea millefolium, Tanacetum balsamita, Calamintha grandiflora, Myrrhis odorata et Monarda didyma.....................................99 II.1 . Pyramides Olfactives ................................................................................................................................99 II.1.1 . Les notes de tte................................................................................................................................99 II.1.2 . Les notes de cur..............................................................................................................................99 II.1.3 . Les notes de Fond .............................................................................................................................99 II.2 . Ralisation des Pyramides Olfactives.....................................................................................................100 II.2.1 . Pyramides Olfactives des 5 huiles essentielles des plantes aromatiques selectionnes ..................100 II.3 . Activit odorante des composs organiques volatils value par CPG-Olfactomtrie ...........................101 II.3.1 . Rsultats de lanalyse sensorielle en CPG-O de lHE dAchillea millefolium ................................102 II.3.2 . Rsultats de lanalyse sensorielle en CPG-O de lHE de Calamintha grandiflora.........................103 II.3.3 . Rsultats de lanalyse sensorielle en CPG-O de lHE de Tanacetum balsamita.............................104 II.3.4 . Rsultats de lanalyse sensorielle en CPG-O de lHE de Myrrhis odorata.....................................105 II.3.5 . Rsultats de lanalyse sensorielle en CPG-O de lHE de Monarda didyma ...................................106 III . Activits biologiques des huiles essentielles et des rsidus de lhydrodistillation..................................107 III.1 . Introduction sur lactivit antioxydante.................................................................................................107 III.2 . Evaluation de lactivit antioxydante des huiles essentielles ................................................................108 III.2.1 . Evaluation de lactivit antioxydante des HE en utilisant la mthode Oxipress............................108 III.2.2 . Evaluation de lactivit antioxydante des HE via des mthodes spectrophotomtriques (dines et trines conjugues) .....................................................................................................................................115 III.3 . Evaluation de lactivit antioxydante des rsidus dhydrodistillation des 5 plantes aromatiques par la mthode de DPPH ...........................................................................................................................................120 III.3.1 . Principe de la mthode de DPPH...................................................................................................120 III.3.2 . Comparaison des activits antioxydantes des rsidus dhydrodistillation mesures par la mthode de DPPH. ....................................................................................................................................................123 III.4 . Evaluation de lactivit antibactrienne des huiles essentielles.............................................................126 III.4.1 . Evaluation de lactivit antibactrienne en utilisant la mthode de diffusion sur Agar.................127 III.4.2 . Evaluation de lactivit antibactrienne en utilisant la mthode de plaque de micro titrage. ........130

CHAPITRE III :...............................................................................................................132 MISE EN PLACE DUNE METHODOLOGIE INSTRUMENTALISEE DE CARACTERISATION RAPIDE DES HUILES ESSENTIELLES NATIVES ; APPLICATION PRE-INDUSTRIELLE A LAROMATISATION DES HUILES VEGETALES PAR LES PLANTES AROMATIQUES .................................................132Rsum :..............................................................................................................................................................134 Partie I. Voie analytique ....................................................................................................................................135 Introduction : .....................................................................................................................................................135 (A) Premire approche analytique base sur une technique dchantillonnage classique couple un systme de sparation/dtection sophistiqu....................................................................................................136

Caractrisations chimiques et biologiques dextraits de plantes aromatiques oublies de Midi-PyrnesI . Analyses des COVs mis par les feuilles par lintermdiaire de la CPG bidimensionnelle. ...................136 I.1 . Principe de la CPG bidimensionnelle ......................................................................................................136 I.1.1 . Sparations orthogonales..................................................................................................................137 I.2 . Matriels et mthodes ..............................................................................................................................138 I.2.1 . Echantillons......................................................................................................................................138 I.2.2 . Extraction des COV par SPME ........................................................................................................138 I.2.3 . Analyses chromatographiques des COVs par CPG-2D....................................................................138 II . Rsultats de lextraction et de lanalyse des COVs des feuilles de Tanacetum balsamita par SPME/CPG-2D...................................................................................................................................................139 (B) Deuxime approche analytique base sur un systme dchantillonnage coupl un systme de sparation/dtection classique...........................................................................................................................142 I . Description du systme..................................................................................................................................142 II . Comparaison du profil aromatique de lhuile essentielle de Tanacetum balsamita et du profil CFDDHS/GC de la plante..........................................................................................................................................143 II.1 . Matriel et Mthodes ..............................................................................................................................143 II.1.1 . Concentration des COV par Headspace dynamique .......................................................................143 II.1.2 . Concentration des COV dune feuille non froisse par Headspace dynamique..............................144 II.1.3 . Isolement de lhuile essentielle de Tanacetum balsamita ...............................................................144 II.1.4 . Analyses chromatographiques des extraits .....................................................................................144 II.2 . Rsultats de la comparaison entre une huile essentielle extraite par hydrodistillation et une huile essentielle native .............................................................................................................................................144 III . Conception dune cellule dextraction ddie CFD couple un systme de pigeage Headspace dynamique et semi-statique ...............................................................................................................................148 IV . Application du systme CFD lanalyse de la fraction volatile de Calamintha grandiflora ................149 IV.1 . Analyses chromatographiques...............................................................................................................149 IV.2 . Optimisation des conditions dextractions par CFD-SPME ou CFD-DHS...........................................149 IV.2.1 . Choix des fibres SPME : cintique dadsorption et dabsorption de la pulegone..........................149 IV.2.2 . Optimisation du froissement du vgtal ........................................................................................151 IV.2.3 . Observation microscopique au niveau du limbe des feuilles.........................................................151 IV.2.4 . Comparaison des fractions volatiles extraites par CFD-SPME et CFD-DHS et de lhuile essentielle ....................................................................................................................................................................152 Conclusion Partie I.............................................................................................................................................154 Partie II : Approche prindustrielle de laromatisation des huiles vgtales par les plantes aromatiques155 Introduction........................................................................................................................................................155 I . Matriels et mthodes....................................................................................................................................156 I.1 . Huile de tournesol ....................................................................................................................................156 I.2 . Prparation des chantillons feuilles fraches infuses dans lhuile de tournesol : HI.FF........................157 I.2.1 . Optimisation du temps dexposition de lhuile infuse et soumise aux ultrasons ............................158 I.2.2 . Prparation des infusions de plantes aromatiques fraches dans lhuile de tournesol ......................161 I.3 . Prparation dinfusions de plantes aromatiques sches dans lhuile de tournesol : HI.FS .....................161 I.4 . Prparation des infusions de plantes aromatiques sches et dhuile essentielle HI.HE.FS ....................163 I.5 . Analyses de lespace de tte des huiles infuses......................................................................................163 I.5.1 . Fibre SPME, choix de la fibre et conditionnement ..........................................................................163 I.5.2 . Prparation des huiles infuses analyser : extraction des COVs ...................................................163 I.5.3 . Analyse chromatographique des chantillons des huiles infuses ou aromatises...........................164 II . Rsultats et interprtations .........................................................................................................................164 II.1 . Evolution de la concentration des COVs mis des huiles aromatises ou infuses en fonction du temps .........................................................................................................................................................................164

Caractrisations chimiques et biologiques dextraits de plantes aromatiques oublies de Midi-PyrnesII.1.1 . Evolution de la quantit de tanacetone dans l'espace de tte de l'huile de tournesol infuse par les feuilles sches de la Balsamite et son HE .................................................................................................164 II.1.2 . Evolution de la quantit du camphre (exprime par laire du pic ) dans d'espace de tte de l'huile de tournesol aromatise par les feuilles schs dA. millefolium et son HE ....................................................165 II.1.3 . Evolution, de la quantit de tanacetone dans lespace de tte de lhuile de tournesol aromatise par les feuilles fraches de Balsamite................................................................................................................165 II.1.4 . Evolution de la quantit de tanactone dans l'espace de tte de l'huile de tournesol infuse par les feuilles sches de la Balsamite..................................................................................................................166 II.2 . Rsultats de laromatisation par infusion de matire vgtale et par ajout dHE dans les huiles vgtales .........................................................................................................................................................................167 II.2.1 . Huile de tournesol aromatise par lHE dAchillea millefolium .....................................................168 II.2.2 . Huile de tournesol aromatise par lHE de Calamintha grandiflora ..............................................170 II.2.3 . Huile de tournesol aromatise par lHE de Tanacetum balsamita ..................................................172 II.2.4 . Huile de tournesol aromatise par lHE de Myrrhis odorata ..........................................................174 II.2.5 . Huile de tournesol aromatise par lHE de Monarda didyma.........................................................175 Conclusion Partie II ...........................................................................................................................................177

CONCLUSION GENERALE ..........................................................................................179 PARTIE EXPERIMENTALE .........................................................................................187I . Techniques dextraction des huiles essentielles...........................................................................................189 I.1 . Diffrentes techniques dextraction des huiles essentielles......................................................................189 I.1.1 . Entranement la vapeur..................................................................................................................189 I.1.2 . Hydrodistillation ..............................................................................................................................192 Calcul de la teneur en matire sche et du rendement en huile essentielle.................................................192 I.1.3 . Hydrodistillation dAchillea millefolium..........................................................................................194 I.1.4 . Hydrodistillation de Calamintha grandiflora...................................................................................194 I.1.5 . Hydrodistillation de Tanacetum balsamita ......................................................................................195 I.1.6 . Hydrodistillation de Myrrhis odorata ..............................................................................................195 I.1.7 . Hydrodistillation de Monarda didyma .............................................................................................195 I.2 . Extraction des composs organiques volatils (COVs) .............................................................................195 I.2.1 . Microextraction en phase solide (SPME).........................................................................................195 I.2.2 . Choix de la fibre SPME ...................................................................................................................197 II . Analyses chimiques et sensorielles des huiles essentielles et des COVs ...................................................197 II.1 . Analyse par chromatographie phase gazeuse .........................................................................................197 II.1.1 . Dtecteurs .......................................................................................................................................198 II.2 . Les mthodes couples ...........................................................................................................................199 II.2.1 . Chromatographie en phase gazeuse / spectromtrie de masse ........................................................199 II.2.2 . Protocoles des analyses quantitatives et qualitatives des huiles essentielles...................................199 II.2.3 . Chromatographie en phase gazeuse / olfactomtrie (CPG/O).........................................................200 II.3 . Etablissement des pyramides olfactives..................................................................................................200 III . Extraction des antioxydants partir des rsidus dhydrodistillation ....................................................201 III.1 . Principe dextraction par soxhlet...........................................................................................................201 III.2 . Extraction des antioxydants...................................................................................................................202 IV . Evaluation de lactivit antioxydante des rsidus dhydrodistillation par la mthode de DPPH ........202 IV.1 . Prparation des chantillons doser .....................................................................................................202 IV.2 . Dosage spectrophptomtrique par la mthode du DPPH des solutions issues des rsidus dhydrodistillation ...........................................................................................................................................203 IV.2.1 . Calcul du pourcentage dinhibition (%I) et de la concentration inhibitrice minimale (IC50).........203 V . Evaluation de lactivit antioxydante des huiles essentielles ....................................................................204 V.1 . Evaluation de lactivit antioxydante des huiles essentielles par la mthode Oxipress..........................204

Caractrisations chimiques et biologiques dextraits de plantes aromatiques oublies de Midi-PyrnesV.2 . Evaluation de lactivit antioxydante de lhuile essentielle par des mthodes spectroscopiques (dines et trines conjugus)............................................................................................................................................206 VI . Evaluation de lactivit antimicrobienne ..................................................................................................207 VI.1 . Evaluation de lactivit bactricide par la mthode de diffusion sur Agar............................................207 VI.2 . Evaluation de lactivit antimicrobienne par la mthode de micro dilution..........................................207

RFRENCES BIBLIOGRAPHIQUES ........................................................................209Liste des Tableaux..............................................................................................................................................225 Publications et participation des congrs......................................................................................................227

Introduction

Introduction Gnrale

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Introduction

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Introduction La rgion franaise de Midi-Pyrnes possde une flore riche et peu valorise. Les environs dune grande rgion comme la rgion Midi-Pyrnes sont soumis de fortes pressions foncires comme le dveloppement de lhabitat rsidentiel, la progression et le renforcement des infrastructures et labandon de certaines pratiques agricoles. Les espaces qui abritaient traditionnellement une vgtation riche et diversifie ont tendance rgresser. Parmi cette vgtation qui se rarfie, on trouve les plantes aromatiques mdivales traditionnellement utilises par nos anctres pour laromatisation des aliments, les arts culinaires et les vertus mdicinales. Ces plantes ne sont pas valorises dun point de vue de leur potentiel chimique sensoriel ou biologique. Les plantes aromatiques sont prometteuses et constituent une grande source dantioxydants et dantibactriens naturels pour lindustrie agroalimentaire. En effet, loxydation des lipides dans les produits alimentaires induit non seulement une diminution de la valeur nutritive de laliment, mais aussi des effets reconnus nuisibles pour le consommateur et qui peuvent tre associs des risques de cancer chez lhomme. La prsence dantioxydants dans lalimentation est devenue essentielle pour la qualit et la scurit de laliment. Les effets ngatifs des antioxydants synthtiques encouragent leur substitution par des agents naturels. Diffrentes plantes aromatiques sont caractrises par la biosynthse de molcules odorantes qui constituent ce quon appelle les huiles essentielles (HE) connues depuis longtemps pour leur activit antiseptique et thrapeutique dans la mdecine populaire. La composition chimique des HE est assez complexe, les composs terpniques et aromatiques reprsentant les principaux constituants. On y trouve galement, et en faibles concentrations des acides organiques, des ctones et des coumarines volatiles. La nature de la fonction chimique du compos majoritaire (phnol, alcool, aldhyde, ctone) joue un rle prpondrant dans lefficacit de leurs activits biologiques. Les plantes mdicinales et aromatiques sont utilises depuis longtemps dans le processus de stress oxydatif et la lutte contre les maladies infectieuses. Mais la dcouverte des antioxydants synthtiques et des antibiotiques a provoqu le dclin de la mdecine base de plantes et la relgue un rang secondaire. Ceci nous a amen nous pencher sur ltude des activits odorante, antioxydante et antimicrobienne dextraits de plantes aromatiques oublies de la rgion de Midi-Pyrnes. Ce sujet nous a sembl dautant plus intressant que la flore des Pyrnes est extrmement riche en plantes aromatiques riches en huiles essentielles.

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Introduction Dans le premier chapitre de ce manuscrit, nous avons recens une centaine de plantes aromatiques rgionales, partir desquelles nous avons slectionn, selon diffrents critres, cinq plantes aromatiques mdivales : Achillea millefolium, Calamintha grandiflora, Tanacetum balsamita, Myrrhis odorata et Monarda didyma. Le deuxime chapitre est consacr lappliation du principe dagro-raffinage sur les 5 plantes. Pour cela, des extractions de fractions volatiles (huile essentielle) et de fractions non volatiles (rsidu dhydrodistillation) ont t effectues. Des tudes physico-chimiques, sensorielles et biologiques des extraits obtenus ont t ralises pour caractriser les mtabolites secondaires prsents et juger de lintrt des fractions. Dans le troisime chapitre, du fait de la raret du vgtal tudi, nous nous sommes intress deux approches dvaluation rapide du potentiel aromatique des plantes huile essentielle ; dans un premier temps, au moyen dun chantillonnage classique coupl un dtecteur forte sensibilit comme la chromatographie bidimensionnelle et dans un second temps par un chantillonnage spcifique coupl un dtecteur classique pour lequel nous avons dvelopp un appareillage novateur dnomm Crushing Finger Device . Enfin, nous avons tudi la faisabilit dune application prindustrielle agroalimentaire des cinq plantes aromatiques. Des tudes doptimisation dinfusion et daromatisation dhuiles vgtales par leurs huiles essentielles ont t dveloppes dans cette dernire partie du chapitre.

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Chapitre I : Etude Bibliographique

Chapitre IEtude bibliographique

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IntroductionLa rglementation REACH met diffrents textes en vigueur pour les substances et prparations chimiques. Ces textes comprennent les rgles qui ont prvalu pour les propositions de classement de l'EFFA (European Flavor and Fragrance Association) en collaboration avec l'EFEO (European Federation of Essential Oils). L'industrie propose donc une harmonisation des classements pour qu'il n'y ait pas de facteur de concurrence sur des lments de scurit. Les huiles essentielles sont classes sur la base de rsultats de tests directs sur leurs proprits physiques, chimiques, toxicologiques et cotoxicologiques. Cependant, de nombreux rsultats ne sont pas disponibles ou trop anciens ou imprcis pour tre valables. En 2002, le comit du Codex alimentaire a transmis des normes de catgorie I concernant lesadditifs alimentaires ainsi que les aromatisants la Commission afin quelles soient adoptes en tant que normes consultatives du Codex. Sur 60 normes dadditifs alimentaires, 42 normes dantiagglutinants (6), dexhausteurs darmes (17), ddulcorants (11) ainsi que dpaississants (8) ont t transmises afin dadopter de nouvelles limites concernant des mtaux lourds spcifiques comme le plomb et larsenic.

En 2009, ce mme comit a mis 342 spcifications, dont 317 pour des aromatisants et 25 pour des additifs alimentaires; 2 spcifications ont t retires. De plus, 50 additifs alimentaires ont t rviss (anti-agglomrants, aromatisants, dulcorants, paississants) pour leur teneur en mtaux lourds. Les consquences de ces classements vont conduire d'aprs l'EFFA la disparition force de 20% des formulations aromatisantes existantes, voire la remise en cause du concept d'aromatisant Identique-Nature. Ceci va donc accrotre la demande industrielle pour les aromatisants naturels, en particulier ceux labelliss WONF (With Other Natural Flavor), conomiquement plus rentables. Les agents aromatisants sont des molcules chimiquement dfinies pouvant tre naturelles lorsquextraites de plantes ou identiques aux naturelles lorsquon synthtise chimiquement une substance dj prsente dans une source naturelle. Enfin, elles peuvent aussi tre artificielles lorsquon synthtise des molcules qui ne sont pas prsentes dans la nature. Dautres procds sont mis en uvre dans la cration de nouveaux armes tels que les armes de Maillard et les armes de fume.

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Chapitre I : Etude Bibliographique Prparations aromatisantes procd physique ou biotechnologique Naturels

Substances aromatisantes isoles & chimiquement dfinies Naturelles procd physique ou biotechnologique Identiques aux naturelles Artificielles

Synthse chimique

Armes de transformation Armes de Maillard

Armes de fume Extraits de fume (Rglement 2065/2003) Dans le cadre de la recherche de nouveaux aromatisants naturels type WONF (Identiques aux naturelles), et afin de combler la diminution rglementaire des aromatisants naturels prsents sur le march, il existe deux diffrentes voies de prospection. La premire voie concerne lexploitation du potentiel aromatique des plantes exotiques rares. Par exemple, les socits de secteur de lindustrie aromatique ont depuis quelques annes entrepris plusieurs expditions en Amrique du Sud ainsi quen Afrique occidentale (Neblina, IFF, Yves Rocher et TasteTrek, Givaudan) la recherche de nouvelles fragrances et saveurs La deuxime voie est la valorisation des plantes aromatiques mdivales ; ces dernires ne sont plus cultives et poussent ltat sauvage. Rares sont les tudes scientifiques ayant mis en vidence leurs potentiels aromatiques ou biologiques afin de favoriser leur culture parce quelles sont devenues menaces voire rares en fonction des rgions. Lobjectif de cette thse est l'application du concept dAgroRaffinage aux plantes aromatiques mdivales du patrimoine vgtal de Midi-Pyrnes. Ceci dans le but de valoriser de manire squence les diffrents constituants de la plante. Dans une premire tape, une tude bibliographique a t ralise partir danciens ouvrages botaniques ainsi que de rfrences bibliographiques afin de remonter des plantes rgionales utilises par nos anctres pour leurs activits odorantes, culinaires ou mdicinales. Dans une deuxime tape, des tudes physicochimiques, sensorielles et biologiques des fractions volatiles et non volatiles des plantes mdivales slectionnes ont t ralises pour juger de leurs proprits aromatiques et biologiques et de leur intrt dans le cadre des nouvelles rglementations europennes.

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I. Plantes aromatiques mdivales de la rgion de Midi-PyrnesLa rgion Midi-Pyrnes possde une flore riche et non valorise, ceci concerne tout particulirement les plantes aromatiques. Cette thse sinscrit dans le programme AROMATIC, qui vise la conception d'une nouvelle gnration daromatisants naturels labelliss WONF. Lexpdition MIPAROM (Midi-Pyrnes-Aromatique) a t conduite dans le cadre de cette thse afin de collecter et danalyser des varits de plantes aromatiques mdivales rgionales. I.1. Historique A la fin des annes 60, G.Bosc publiait son Guide dherborisation et de dtermination des vgtaux vasculaires de la rgion Toulousaine . Selon lauteur, cet ouvrage portait sur un rayon de 20 30 Km autour de Toulouse (Nature Midi-Pyrnes, 2004) . Les environs dune grande rgion comme la rgion Midi-Pyrnes sont soumis de fortes pressions foncires (dveloppement de lhabitat rsidentiel, progression et renforcement des infrastructures...) ou bien labandon de certaines pratiques agricoles. De nombreux espaces naturels sont dtruits au profit de zones industrielles ou rsidentielles proximit dune grande agglomration. Les espaces qui abritent traditionnellement une vgtation riche et diversifie ont tendance rgresser. I.2. Les Milieux relictuels Cette volution cre des milieux alors qualifis de relictuels (Nature Midi-Pyrnes, 2004) quil est possible de distinguer en deux types : 1. Des milieux naturels ou cologiquement riches qui ont pu perdre de leur intrt par rduction de leur superficie. La progression de lagglomration et de ses infrastructures laisse subsister des lambeaux boiss, quelques prairies humides isoles et de faibles surfaces, quelques pelouses sches sur des coteaux et quelques zones humides : ce sont alors des milieux rsiduels. 2. Des milieux qui ont t artificiellement crs par les activits de lhomme Des zones refuge se crent avec les diffrents amnagements tels que le talus routiers, les bords de routes et les fosss.

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I.3. Notion de raret La notion de raret dune plante est dfinie de la manire suivante: Ce sont des plantes qui ont un statut national de protection (Arrt Ministriel fixant la liste des plantes protges sur le territoire national) ou qui sont inscrites sur le livre rouge de la flore menace de France. Ces plantes ont t limines lors de la premire slection. Ce sont des plantes rares ou peu frquentes localement. Il sagit de plantes menaces dans la zone tudie. Elles peuvent cependant tre plus frquentes et plus rpandues dans les zones voisines moins urbanises et moins agricoles. I.4. Distribution botanique et mondiale des plantes aromatiques mdivales. Les plantes aromatiques mdivales sont par dfinition des plantes sauvages en majorit non cultives, poussant en Europe, en Asie de lEst et en Amrique du Nord. La recherche bibliographique sur ces plantes mdivales montre quelles appartiennent essentiellement aux 3 familles botaniques suivantes : Astraces, Lamiaces et Apiaces. I.4.1. Famille des Astraces : morphologie, date dintroduction et distribution. La famille des Astraces (Composes) est la plus vaste famille de la division des spermatophytes, avec plus de 900 genres et au moins 12 000 espces rpandues sur toute la plante. Les composes sont relativement moins abondantes dans l'ancien monde que dans l'Amrique du Nord o elles forment environ un huitime de la flore vasculaire. Elles sont probablement apparues la fin du Ctac ou au dbut de l'Eocne, et le point d'origine parat tre la rgion andine de l'Amrique du Sud o elles constituent aujourd'hui un quart de la flore vasculaire. Les traits saillants de la distribution gographique de cette immense famille ont une grande porte biologique. Les tribus des Astres et des sneciones sont toutes cosmopolites ou peu prs. Les Cichories, les Cynares et les Anthmides appartiennent surtout l'hmisphre nord. Les Calendules et les Arctotides sont africaines. Les Vernonies, les Eupatories, les Hlianthes, les Hlnies et les Mutisies sont essentiellement amricaines. La grande tribu des Inules appartient surtout l'ancien monde. Les espces extra-tropicales communes aux deux hmisphres ne sont gure plus d'une quarantaine (Moreau, 1960). L'Afrique, l'Australie et l'Amrique occidentale paraissent possder les reprsentants les plus anciens du groupe. L'Afrique offre la plus grande varit

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Chapitre I : Etude Bibliographique de tmoins isols des types teints. L'Amrique andine possde quelques espces qui se rapprochent du type que l'on peut considrer comme le type primitif de la famille entire. La majorit des plantes mdivales que nous avons choisies est rpartie surtout en Europe, Asie et lAmrique du Nord. Une distribution gographique sauvage importante de cette famille existe aussi en Turquie, Canada, Inde, Iran et les pays Baltes (Ivancheva et al., 2003). I.4.2. Famille des Lamiace : morphologie, date dintroduction et distribution La deuxime famille botanique constituant les plantes mdivales est celle des Lamiaces (Labie). La forme de la fleur et la prsence dhuiles essentielles signent cette famille (Kaufmann et al., 1994). Cette famille de plantes angiospermes dicotyldones fleurs gamoptales irrgulires qui regroupe surtout des plantes herbaces et sous-arbustives rparties dans le monde entier. Les Lamiaces herbaces, annuelles ou vivaces, sont trs nombreuses et trs rpandues en France, exemple les Thyms, les Lavandes, les Romarins sont surtout abondants dans les rgions mditerranennes (Moreau, 1960).

Les Lamiaces comptent plus de trois mille cinq cents espces, quelque deux cents genres, rpartis en sept sous-familles. I.4.3. Famille des Apiaces : morphologie, date dintroduction et distribution La troisime famille constituant les plantes aromatiques mdivales est la famille des Apiaces (Apiaceae), appele anciennement Ombellifre (Umbelliferae). Elle comprend prs de 3000 espces rparties en 420 genres qui sont surtout prsentes dans les rgions tempres du monde. C'est une famille relativement homogne, caractrise notamment par son inflorescence typique, l'ombelle. C'est une vaste famille complexe regroupant des plantes herbaces annuelles, bisannuelles ou vivaces, et parfois des arbustes. Les feuilles sont alternes, souvent grandes et pennatifides (dcoupes en lobes profonds) mais aussi simples. Leur base est souvent engainante et largie (Moreau, 1960). La forme des fleurs a valu cette famille son ancien nom; ce sont des ombelles composes le plus souvent d'une ombelle primaire, avec ou sans bractes, dont chaque branche ou rayon porte une ombelle secondaire (ombellule) avec ou sans bractes secondaires (bractoles). Les fleurs sont souvent petites, cinq parties; les ptales toutes de mme taille ou nettement irrgulires, les fleurs externes d'une ombelle pouvant avoir des ptales externes nettement plus grands que les autres. Les fruits sont souvent dterminants pour identifier genres et espces se ressemblents. Du fait de leurs groupes de petites fleurs en

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Chapitre I : Etude Bibliographique ombelles qui offrent un abondant nectar et une bonne plate-forme datterrissage, les ombellifres sont particulirement apprcies par les insectes pollinisateurs. Cette famille riche en mtabolites secondaires prsente des intrts conomiques et mdicinaux, comportant des coumarines, flavonodes, composs actylniques et des lactones sesquiterpniques, ainsi quune grande richesse en huile essentielle. Cette famille de plantes est bien connue pour avoir une quantit importante dhuile essentielle dans la quasi-totalit de ses organes anatomiques. A nos jours, 760 constituants dhuiles essentielles ont t isols des apiaces (Moreau, 1960). I.5. Dmarche bibliographique de slection des plantes Une premire liste (I) comprenant une centaine de plantes aromatiques oublies de la rgion de Midi-Pyrnes a t tablie (Tableau 1), grce une recherche bibliographique faite partir danciens et nouveaux ouvrages botaniques et de quelques sites internet (Pailleux et al., 1899; Lieutaghi, 1966; De Gubernatis, 1976; De Gubernatis, 1976; Richard, 1992; Veyrat et al., 1997; Saule, 2002; Bertrand, 2003; Bertrand, 2004; Nature Midi-Pyrnes, 2004; Teuscher et al., 2005). Afin de limiter le nombre de plantes, les critres de rejets suivants ont t choisis :

Espce protge Existence dans lhuile essentielle de molcules toxiques ayant fait lobjet de peu dtudes

Plante ayant fait lobjet de nombreuses tudes scientifiques Absence dhuile essentielle dans la plante Existence sous forme arborescente

19 plantes ont alors t slectionnes (liste II) lors de cette seconde slection. Elles sont reprsentes en gras dans le Tableau 1.

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Tableau 1: Liste I des plantes aromatiques mdivales slectionnes, (*) : plantes correspondent la deuxime srie de slection

Nom Latin * Achillea millefolium

Nom Franais

Caractristiques

Achyranthes Aspera * Acinos alpinus Adiantum pedatum * Agastache foeniculum * Agnus-castus Agrimoinia eupatoria Alliaria officinalis Amaranthus retroflexus Anethum graveolens * Angelica archangelica

Achille millefeuille Plante vivace de taille moyenne ou assez leve (jusqu' 1m20), rhizome mettant des stolons, tige dresse simple ou rameuse, plus ou moins velue. Les feuilles rpandent un parfum agrable lgrement menthol Herbe des jeunes On conoit aisment que cette herbe ait pu devenir aprs une origine pareille un Talisman puissant Calament des Alpes Plante vivace de taille modeste (moins de 30cm) tiges couches ou redresses, rameuses la base Adiante L'adiante annonce la gurison Agastache Poivre des moines Aigre moine Alliaire Cette plante dgage un fort arme d'anis. Lodeur des branches de cette arbre combattait les penss impudiques Elle a une varit l'agrimoine odorante qui ressemble l'agrimoine eupatoire mais ses feuilles et ses fleurs sont odorantes Plante vivace odeur alliace surtout au froissement

Motif de slection non slection Retenue

Absence dhuile essentielle Retenue Absence dhuile essentielle Retenue Retenue Absence dhuile essentielle Toxicit de lhuile essentielle Absence dhuile essentielle Nombreuses tudes scientifiques Retenue Retenue

Amaranthe rflchie Une saveur "carne", inimitable Auelle odorante Anglique Anglique des bois Elle est distingue par son odeur forte. l'auelle tait un aromate chez les romains parfume agrablement les parfums Famille Apiace, pays dorigine : Amrique et Europe, odeur typique aromatique, saveur : sucre puis pice voir musque, amre et mme piquante Une saveur frache et un parfum "tendre" loin des canons habituels

* Angelica silvestris

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Nom Latin * Anthriscus sylvestris

Nom Franais Cerfeuil sauvage

Caractristiques Plante vivace de taille moyenne ou assez leve (jusqu' 1,50m) tige dresse, rameuse, nuds peu renfls. Feuille infrieures 3 fois divises. Fleurs blanches, trs aromatiques Son odeur est bien connue qui la diffrencie des autres, saveur lui a fait ses vertus mdicinales Plante vivace de taille moyenne ou assez leve (jusqu' 1,30m) Une espce de noisette parfume indienne Absinthium maximum, mre de toutes les herbes indiquant sa ressemblance avec labsinthe Les fleurs une fois dtach, on les fait scher le plus vite possible pour quils gardent leur couleur el leur parfum Odeur aromatique, lgrement poivre intensifie aprs frottement Une espce de roseau La plante frache est quasi inodore alors qu'aprs dessiccation elle acquiert une odeur trs fine due la coumarine Elle n'est autre que les cheveux hrisss, elle dsigne en sanscrit Jasminum hirsutum elle a une odeur repoussante et dsagrable Feuille et fleur qui offre des gots d'iode, d'esprit marin. tranges armes pour cette plante si loin de la mer. les graines reforment une huile aromatique

Motif de slection non slection Retenue

Apium graveolens Arbutus unedo Areca catechu * Artemisia vulgaris Arnica montana * Artemisia abrotanum Asipatra vana Asperula odorata Attahasaka Ballota nigra Borago officinalis Brassica nigra

Ache Gardien des portes Palmier btel Armoise Arnica Aurone Armes Asperule odorante

Nombreuses tudes scientifiques Absence dhuile essentielle Absence dhuile essentielle Retenue Protge Retenue Absence dhuile essentielle Absence dhuile essentielle Absence dhuile essentielle Absence dhuile essentielle Nombreuses tudes scientifiques Absence dhuile essentielle

Ballote ftide Bourrache Moutarde

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Nom Latin * Calamintha grandiflora Capsicum frutescens Cardamine pentaphyllos

Nom Franais Th dAubrac Poivre de cayenne Dentaire digite

Caractristiques Une saveur menthole et florale. Une plante que tout laguiolais se doit d'avoir en provision pour aborder la saison hivernale Odeur cre lgrement animale

Motif de slection non slection Retenue Nombreuses tudes scientifiques

Carlina acanthifolia

Carline artichaut

Carum carvi Cedrus

Cumin des prs Cdre

Chelidonium majus Terminalia tomentora *Chrysanthemum balsamita ou Tanacetum balsamita Cistus salviifolius Convallaria majalis

Chelidoine Oreille de chvre Balsamite Ciste feuilles de Sauge Muguet

Belle espce vivace de taille, moyenne (70cm au plus) rhizome Protge couvert de grosses cailles triangulaires caractristiques, tige simple, nue la partie infrieure, dresse, munie dans le haut de feuilles luisantes d'un beau vert Belle plante vivace dont le gros capitule se dveloppe mme le sol Protge au centre d'une rosette de feuilles tales, larges, dcoupes en segments garnis de fortes pines Lors de la cueillette, les parfums des feuilles sont particulirement Nombreuses tudes scientifiques prometteurs. Quant aux semences, elles explosent en saveurs anises Le cdre est un genre de conifre de la famille des pinaces, originaire Protge du Moyen-Orient, d'Afrique du Nord et de l'Himalaya, acclimat en Europe, comprenant des espces d'arbres majestueux, bois odorant, cime conique ou tale La plante entire exalte une odeur dsagrable Absence dhuile essentielle Odeur de la chvre Nomme communment au Moyen Age menthe coq, cette plante l'odeur de menthe Arbuste assez bas qui peut atteindre 80cm, pratiquement inodore, rameaux velus non visqueux, munis de feuilles court ptiole Inutile de prsenter l'inflorescence, ni de vanter son parfum, Le rhizome allong, solidement ancr au sol par plusieurs faisceaux de racines adventives, portant des fleurs odorantes en clochettes blanches Absence dhuile essentielle Retenue Forme arbrescente Toxicit de lhuile essentielle

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Nom Latin Crataegus oxyacantha Cucurbita pepo Discordia Galium verum

Nom Franais Aubpine Courge de sweet Herbe de haine Gaillet vrai

Caractristiques Les fleurs sont sches en un lieu bien ar pour jaunir et conserver leur odeur dlicate Petite courge aux armes de chtaigne Indienne

Motif de slection non slection Nombreuses tudes scientifiques Absence dhuile essentielle Absence dhuile essentielle

Juniperus communis Geum urbarum Glechoma hederacea

Genevrier Benote Lierre terrestre

Espce vivace de taille moyenne (1m au plus) glabre ou velue dont les Absence dhuile essentielle tiges gnralement dresses, simples ou ramifies, sont munies de verticilles comptant 6 12 feuilles troites, allonges, bords enrouls, saveur du miel Odeur un peu camphre Nombreuses tudes scientifiques Les racines dgagent un fort parfum de girofle Plante vivace dont les longues tiges rampantes s'enracinent aux noeuds et donnent naissance des tiges florifres redresses de taille modeste (30cm au plus), feuille aromatique dont la saveur pics Plante de 50 60 cm de hauteur, sa racine contient une huile essentielle dont lodeur aromatique rappelle celle du clou de girofle, parfume plusieurs boissons, sche, elle perd ses armes Plante trs dcorative de taille mdiocre (50cm au plus) qui constitue des touffes denses avec des tiges ligneuses la base, tales ou redresses, trs rameuses, blanches-cotonneuses, odeur de curry Grande plante ombellifre vivace atteignant 50cm 1m50 dcouvrirez des armes de mandarine sur les jeunes tiges crues. L'odeur et la saveur des graines rappellent celles des feuilles de coriandre exotique dagrume de mandarine et de noix de coco Absence dhuile essentielle Absence dhuile essentielle

Geum urbanum

Helichrysum stoechas

La Benote bndiction tonique Immortelle

Absence dhuile essentielle

Nombreuses tudes scientifiques

Heracleum sphondylium

Berce commune

Nombreuses tudes scientifiques

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Nom Latin Humulus lupulus

Nom Franais Houblon

Hypericum perforatum Hyssopus officinalis Inula helenium Laurus nobilis Levisticum officinale Lilium sp Matricaria recutita Melissa officinalis * Meum athamanticum

Millpertuis Hysope Aune Laurier Liveche ou Ache Lis orang, safran Camomille sauvage Mlisse Cistre Monarde Cerfeuil musqu

Motif de slection non slection Longue liane (jusqu' 8m) qui se renouvelle tous les ans partir d'une Nombreuses tudes scientifiques souche ligneuse vivace. Sur des sujets distincts, se dveloppent les fleurs mles 5 tamines en grappes rameuses et les fleurs femelles servent aromatiser les bires Les feuilles, les fleurs soignent les "brlures" L'huile issue de la Nombreuses tudes scientifiques macration des sommits fleuries d'un rouge fonc est trs aromatique Trs aromatique Nombreuses tudes scientifiques Les racines prennent au schage une odeur d'Iris Parfum balsamique et pic Une puissance aromatique, elle est recommande pour restaurer l'apptit Connue par le nom : la fleur des fleurs Plante annuelle glabre, odeur prononce de camomille, de taille mdiocre (60cm au plus) sche perd rapidement son huile essentielle Un got anis si mystrieux. Pour nous, qui l'avons choisie pour illustrer notre image, elle est source de souvenirs, d'histoire et de sagesse Ses corolles dclinent des parfums citronns, des gots pics Tiges sucres et anises Nombreuses tudes scientifiques Nombreuses tudes scientifiques Nombreuses tudes scientifiques Absence dhuile essentielle Nombreuses tudes scientifiques Nombreuses tudes scientifiques Retenue Retenue Retenue

Caractristiques

* Monarda didyma * Myrrhis odorata

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Nom Latin Myrtus communis Narcissus pseudonarcissus

Nom Franais Myrte Narcisse jaune

Caractristiques Prince des vgtaux odorants, menthol

Motif de slection non slection Forme arborescente

Ocimum basilicum

Basilic

Origanum majorana Origanum vulgare

Marjolaine Marjolaine sauvage

Ds la fin de l'hiver jusqu'au dbut de juin en altitude, la floraison des Absence dhuile essentielle Narcisses relaie celle du Galanthe des neiges. Issu d'un bulbe assez gros, accompagn par 2 4 feuilles d'un vert un peu glauque, parfume des valles entires La multitude de varits propose aujourd'hui est phnomnale. Des Nombreuses tudes scientifiques parfums de citron, de rglisse, en passant par le camphre, l'anis, et leur usage offre une palette de saveurs inestimable agrable odeur parfume, voir pice Nombreuses tudes scientifiques Plante vivace dont les tiges rameuses dresses, munies de feuilles ptioles ovales, peuvent atteindre 60cm. Les fleurs roses accompagnes de bractes lancoles d'un rouge violac Odeur trs aromatique Exemple types de lgumes oublis, ses feuilles parfument les potages et ses petits fruits aplatis Espce vivace dont la taille peut atteindre 6m. A partir d'un rhizome ramifi et trs allong, s'lvent les tiges paisses, mais peu rsistantes, car non ligneuses un arbre plein de vie, le bourdonnement des abeilles et il embaume l'atmosphre. Un parfum, un got tout en finesse utilis pour les sucreries. Parfum agrable lgrement camphr Parfum brod d'insecte Odeur particulire aromatique voir pice Nombreuses tudes scientifiques

Pastinaca sativa Phragmites australis

Panais Roseau

Toxicit de lhuile essentielle Forme arbrescente

Robinia pseudacacia

Acacia

Forme arbrescente

Rosmarinus officinalis Rosa canina Ruta graveolens

Romarin Eglantier Rue

Nombreuses tudes scientifiques Nombreuses tudes scientifiques Nombreuses tudes scientifiques

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Nom Latin Salvia officinalis Salvia pratensis

Nom Franais Sauge Sauge commune

Caractristiques Feuilles aromatiques voir camphr Plante vivace de taille moyenne (80cm au plus) tige simple ou peu ramifie. Les feuilles ne sont pas odorantes mais la hampe florale est recouverte dune substance collante qui dgage un parfum plaisant lgrement citronn la fois frais. Parfum de musc, ses fleurs donnent leur arme de muscat, vins parfums Exalte des armes de noisettes.

Motif de slection non slection Nombreuses tudes scientifiques Nombreuses tudes scientifiques

* Sambucus nigra Sanguisorba minor Satureia hortensis Spiraea ulmaria

Sureau noir Pimprenelle Sariette Reine des prs Epiaire des bois

Retenue Absence dhuile essentielle

* Stachys sylvatica

Syzygium aromaticum Tagetes tenuifolia * Tanacetum vulgare

Girofle Tagette Tanaisie commune

odeur fortement pice et camphre avec de rminiscences de thym et Nombreuses tudes scientifiques d'origan Plante herbace vivace au port lgant do son nom de "Reine", Nombreuses tudes scientifiques rhizome rampant noueux et aux racines fibreuses, dont la taille va de 1 1,50 m. A force de se terrer au fond des bois, on jurerait quelle en a pris Retenue lodeur, lorsquon froisse entre les doigts ses feuilles velues sent fortement lhumus avec cependant une nuance menthole Odeur caractristique chaude pice, sucre, fortement aromatique Nombreuses tudes scientifiques Petites fleurs de couleur jaune au parfum de citron et d'orange Belle espce vivace, glabre, de taille assez leve (jusqu' 1m50) tiges droites, dresses, anguleuses, ramifies au niveau de l'inflorescence, munies de feuilles profondment dcoupes, feuillage trs aromatique Aromatique discrte, odeur trs lgrement alliaces, couleur blanc jauntre Nombreuses tudes scientifiques Retenue

Teucrium scorodania

Germandre

Toxicit de lhuile essentielle

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Nom Latin Thlapsi arvense

Nom Franais Tabouret

Caractristiques

* Thymus serpyllum

Urtica dioica

Valeriana officinalis

* Tussilago farfara Viola sp Zingiber officinale

Plante annuelle glabre, de 60cm au plus, qui met une odeur d'ail au froissement. La tige simple ou rameuse, dresse, est munie la base de feuilles ptioles, saveur piquante, odeur forte Thym pilosit Plante vivace basse (15cm au plus) longs stolons rampants sans Retenue variable, serpolet faisceaux de feuilles ; rameaux florifres velus sur 2 faces opposes seulement (hors entre-nud suprieur), feuilles plus grandes prs de l'inflorescence, trs aromatique. Grande ortie C'est une des espces les plus banales et les mieux connues cause de Absence dhuile essentielle ses feuilles et tiges hrisses de poils rigides qui provoquent des irritations douloureuses, got dharicot vert Valriane des collines Espce vivace souche courte trs odorante qui produit des stolons Nombreuses tudes scientifiques termins par des rosettes de feuilles. Les stolons sont souterrains avec des feuilles nombreux segments troits, trs odorants Tussilage Particularit de fleurir avant de produire ses feuilles, saveur Retenue aromatique proche de celle de la marguerite Violette Un parfum de sucrerie Absence dhuile essentielle Gingembre Plante herbace vivace besoin de beaucoup de soleil renferme plusieurs poils piquants Nombreuses tudes scientifiques

Motif de slection non slection Absence dhuile essentielle

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Chapitre I : Etude Bibliographique Une tude bibliographique gnrale a t effectue sur les 19 plantes aromatiques slectionnes dans la liste II, suite la volont de travailler sur le plus grand nombre possible de plantes pendant la thse, nous avons pu choisir 5 plantes aromatiques (Tableau 2) en suivant les critres de slection suivants : (I) les plantes peu tudies jusqu prsent et (II) la diversit des notes odorantes.Tableau 2: Liste des 5 plantes aromatiques selectionnes

Nom Latin

Caractristiques organoleptiques

Nombre de publications scientifiques

Image

Achillea millefolium

Feuilles : parfum lgrement menthol

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Tanacetum balsamita

Feuilles : odeur de menthe forte

17

Calamintha grandiflora

Feuilles : saveur lgrement menthole dominante florale 3

Myrrhis odorata

Tiges : sucre et anise

5

Monarda didyma

Corolles : parfum citronn, got pic

6

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II. Etude bibliographique des cinq plantes aromatiques mdivales slectionnesII.1. Achillea millefolium : informations botaniques, structurales et culturales

Figure 1: Planche botanique dAchillea millefolium L. (Wilhelm, 1885)

Famille : Asteraceae Genre: Achillea Espce: Achillea millefolium L. Sous-espce: Achillea millefolium subsp. millefolium Varit : Achillea millefolium var. millefolium

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Chapitre I : Etude Bibliographique II.1.1. Noms et origine Achillea millefolium L. (Asterace), qui est connue comme lachille millefeuille est distribue de faon sauvage en Amrique du nord et en Europe. Elle comprend plusieurs types ttraplode, hexaplode et plusieurs hybrides. Le genre Achillea est reprsent par 85 espces majoritairement rpandues en Europe, Asie et Amrique du Nord. LAchille millefeuille a t utilise comme herbe mdicinale (Orav et al., 2006), Le nom dAchille dsigne le hros grec Achille, qui a utilis dit on, cette plante sur le champ de bataille pour tancher le saignement des blessures de ses hommes. Elle panouit de mai la fin de lautomne ses fausses ombelles blanches, parfois roses, au long des chemins, des voies ferres, dans les terrains vagues, les cultures, les friches. Cette Astrace se distingue des Apiaces, avec lesquelles les non botanistes pourraient la confondre, par lexamen de ses petites fleurs qui sont en ralit des capitules et par le fait que leurs pdoncules communs ne partent pas dun mme point sur la tige principale. Ces caractres, joints ceux des feuilles, troites, bords presque parallles, folioles disposes sur deux rangs, et trs finement dcoupes, la rendent aisment reconnaissable. II.1.2. Distribution nationale

(Le rseau de la botanique francophone)

II.1.3. Usage tonique stomachique Herbe Militaire, Herbe Coupures, Herbe aux charpentiers, ces noms disent assez que lAchille millefeuille fut autrefois tenue en estime par ceux que leur profession exposait au coup de sabre ou au coup dherminette. Lusage interne de lAchille Millefeuille a fait lobjet23

Chapitre I : Etude Bibliographique dun grand nombre de travaux qui ont montr son utilit comme tonique amer, hmostatique, emmnagogue (AFSSAPS, 2009). On emploie les sommits fleuries dont la rcolte est possible tout lt. Linfusion 5% est utile dans les maux destomac aigus et chroniques. Linfusion et la macration ont aussi une heureuse influence sur la circulation sanguine. II.1.4. Usage hmostatique Employe lextrieur en topique sur les hmorrodes (Lieutaghi, 1966), les fissures anales, lachille se montre fort efficace et particulirement sur les hmorrodes en agissant non seulement par astringence mais aussi dune manire spciale et directe sur les vaisseaux et les nerfs du rectum et cette action est tout la fois astringente, tonique et sdative. II.1.5. Usage emmnagogue Dans les rgles douloureuses (Lieutaghi, 1966), insuffisantes ou supprimes par une cause accidentelle passagre (froid, motion, etc..) ou mme plus profonde (chlorose, affaiblissement etc..), lusage de linfusion concentre de lAchille millefeuille est dune efficacit reconnue et le flux menstruel peut se produire parfois une demi-heure seulement aprs labsorption. II.1.6. Autres usages LAchille millefeuille est une bonne plante de gazons que lon mle avantageusement aux Gramines. Des tontes frquentes doivent cependant lempcher de monter en fleur. Sa prsence est trs souhaitable dans les prairies temporaires quelle contribue enrichir, la prsence de plantes aromatiques et mdicinales dans les herbages ayant le meilleur effet sur la sant du btail (Lieutaghi, 1966). Aujourdhui, lAchille est utilise principalement dans le domaine mdicinal, parfois dans laromatisation de certaines bires.

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Chapitre I : Etude Bibliographique II.1.7. Proprits physicochimiques et biologiques Dans les 200 annes passes, lhuile essentielle dAchille millefeuille a t un sujet intressant pour plusieurs investigateurs. Les premires productions de lhuile essentielle furent en 1719 par Hoffman (Hoffman, 1935). Cependant Bley (Bley, 1928) est officiellement considr comme tant le premier qui a produit cette huile. Plusieurs recherches ont t cibles vers ltude de lazulne dans lhuile essentielle depuis la dcouverte de sa responsabilit dans la coloration bleue de lhuile essentielle (Weber et al., 2007). Oswiecimska (Oswiecimska, 1974) a dmontr que la prsence de lazulne ou des prcurseurs dazulne dans les diffrentes varits de lAchille est relie au nombre de chromosomes. Les ttraplodes produisent de lazulne ; par contre, les octaplodes et les hexaplodes nen produisent pas. Les auteurs ont concentr leurs travaux sur Achillea millefolium L. qui est une varit hexaplode donc ne produisant pas dazulne. La composition chimique de lhuile essentielle de lAchille millefeuille dpend du nombre de chromosomes de lespce, lhuile distille dune espce ttraplode, octaploide et hexaplode est caractrise par la prsence de chamazulne. Les di et ttraplodes contiennent des proazulnes, qui se transforment leur tour en azulne color. Lhuile distille de lEstonie et de Grce est riche en chamazulne (jusqu'au 25%) (Orav et al., 2006). Leffet du temps dhydrodistillation sur la formation de chamazulne et sur la variation de % des monoterpnes, monoterpnes oxygns, et les autres familles de terpnes a t tudi par Orav et al. (Orav et al., 2001). En effet, les auteurs ont remarqu que le pourcentage de monoterpnes diminue avec laugmentation de temps de lhydrodistillation (0,5, 1, 2 et 3 heures), par contre le pourcentage des monoterpnes oxygns reste stable. Le pourcentage de chamazulne augmente 3 fois plus en passant de 0,5 3heures dhydrodistillation (Orav et al., 2001). Orav et al. ont analys lhuile essentielle de lAchille millefeuille provenant de France (partie traite non prcise) leur rsultats montrent une quantit leve des monoterpnes oxygns (53,9-76,1%), principalement le camphre (jusquau 24,5%), ainsi les et -thujone (jusquau 26.8%), 1,8-cinole (jusqu'au 20,3%) et artemisia ctone (jusquau 10,1%).

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Chapitre I : Etude Bibliographique II.2. Tanacetum balsamita : informations botaniques, structurales et culturales

Figure 2 : Planche botanique de Tanacetum balsamita (Le rseau de la botanique francophone)

Famille : Asteraceae Genre : Tanacetum Espce : Tanacetum balsamita L.

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II.2.1. Noms et origine Dorigine d'Asie occidentale. C'est une plante de climat tempr, largement naturalise en Europe, en Afrique du Nord et en Amrique du Nord. Le chrysanthme balsamique, figure 2 est originaire des rgions sud de l'Europe mais est maintenant cultiv un peu partout jusquen Amrique du Nord. Cette plante connue sous diffrents noms : herbe Sainte-Marie, Balsamita mas, maudin, Balsamita foemina, menthe-coq, et menthe de Notre-Dame. II.2.2. Distribution nationale

(Le rseau de la botanique francophone) II.2.3. Diverses proprits Cette grande compose vivace, parfois cultive dans les jardins, forme des peuplements souvent denses dans les terrains vagues, sur les dcombres, au long des voies ferres, des berges des chemins, dans une grande partie de la France (elle est rare dans lOuest, le Sud-ouest et le Midi (Lieutaghi, 1966). La balsamite fleurit tout lt ; on rcolte ses sommits au dbut de la floraison, les semences la maturit des capitules. Dtroits liens de parent unissent, dans la famille des astraces, la balsamite et la tanaisie. Lune originaire du Midi est cultive dans les jardins comme plante dornement, lautre abondante dans lle de France o on la rencontre sur les berges des rivires, le long des routes, dans les lieux pierreux (Leclerc, 1949). On pourrait mme les confondre nobserver que leurs nombreux capitules disposs en corymbes terminaux qui charment le regard par la teinte dun beau jaune dor de leurs fleurons, particulirement clatants chez la Tanaisie. Mais il suffit de comparer les feuilles des deux espces pour que devienne impossible toute erreur de confusion : presque glabre et dun vert fonc, pennatipartites. C'est-

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Chapitre I : Etude Bibliographique -dire profondment divises en segments rguliers disposs comme les barbes dune plume et dents sur leur bords. Chez la Tanaisie, elles sont, chez la Balsamite, dun vert cendr, pulvrulentes, de forme elliptique, les radicales portes par un long ptiole, celles qui garnissent la tige, sessiles. Au niveau de lolfaction, la fragrance si agrable de menthe ne permet pas de confondre avec celle de Tanaisie. II.2.4. Usage pharmacologique Aux dires du capitaine Bontemps quelle drle dide, on bon toubib, davoir assaisonn cette salade deau de dentifrice et de chicotin ! , en effet, son odeur de menthe sajoute une saveur dune agressive amertume (Leclerc, 1949). Cest ce que la plante renferme, surtout lpoque de la floraison, un principe amer qui sy trouve associ une huile essentielle obtenue par distillation. Quelques 200 ans plus tard, Murray et al. sexprimaient en ces termes sur le compte dune plante si merveilleuse : elle est inusite, bien que son odeur semble promettre quelque activit : je lis quelle fortifie lestomac, calme les coliques, favorise la menstruation, toutes choses qui nont rien de contraire la raison : on peut la prescrire dans les affections hystriques (Murray, 1792). Cette esquisse pharmacologique nous montre dans la balsamite un mdicament utile lestomac, au foie en le rendant plus apte remplir le rle capital qui lui est dvolu dans les actes fondamentaux du mtabolisme (Leclerc, 1949). Tanacetum balsamita L. est bien connue comme une herbe mdicinale. Elle a t utilise depuis des sicles par les gyptiens, les romains, et les grecs. Le nom de la balsamite est d au balsam herb c'est--dire la lgret et le plaisir de lodeur aromatique balsamique de lhuile, qui est prsent dans des poils scrteurs de la surface infrieure de la feuille (Leclerc, 1949). II.2.5. Usages divers Les semences de la Balsamite sont condimentaires ; on peut les rajouter faibles doses sur les viandes, les gibiers, dans les pts, dans les gteaux. Par macration dans lalcool, elles donnent une liqueur assez voisine de la chartreuse mais peu recommandable en raison des proprits convulsivantes de la plante (Leclerc, 1949). C'est une plante qui a dj t utilise dans le procd de brassage de la bire pour la conservation et pour y transmettre un got d'amertume. Les feuilles ont une senteur de menthe citronne qui se conserve trs longtemps mme une fois sches.

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Chapitre I : Etude Bibliographique II.2.6. Cultures La balsamite, rustique et vivace, vit trs facilement en terres fraches et fertiles, assez lgres. On la multiplie par clats de pieds ou par semis de graines en place au printemps. C'est une plante vivace, assez grande, jusqu' 1,2 m, exhalant un parfum agrable rappelant celui des menthes. Les feuilles sont simples, ovales, d'une consistance ferme et bords crnels. Les feuilles infrieures sont longuement ptioles, alors que les feuilles suprieures sessiles embrassent la tige. Les fleurs sont groupes en petits capitules, de 5 6 mm de diamtre, euxmmes groups en corymbes sur une tige dresse. La plante est vivace par sa tige souterraine rampante qui met des bourgeons. II.2.7. Proprits physicochimiques et biologiques Jaimand et al. ont travaill sur lhuile essentielle de la balsamite provenant de lIran (Jaimand et al., 2005) en sparant les diffrents organes (feuille, fleur et tige), les composs majoritaires qui constituent la composition des trois diffrentes huiles obtenues sont : actate de bornyle, pinocarvone, camphre et terpinolne, avec des variations quantitatives significatives en fonction de lorgane tudi. En 1968, Gockeritz a dfini 2 chmotypes de Tanacetum balsamita en fonction de la dominance du terpne (type camphre: Balsamita major (L.) Desf. Asch) et type carvone: Tanacetum balsamita (L.) Desf. var. tanacetodes (Boiss) Fiori (Goeckeritz, 1968). Dans la littrature de Bestman et al. en 1984, on a propos un 3me chmotype avec la dominance des deux composs carvone et camphre dans lhuile essentielle (Bestmann et al., 1984). En 1968, Gockeritz et al. ont analys lHE des feuilles de la Balsamite de type camphre (91%) (Goeckeritz, 1968). En 1938, Voight et al. ont analys la composition chimique de lHE de la balsamite type carvone (Voigt et al., 1938). En 1973, Juknevicien et al. ont tudi la variation de la composition chimique de lHE en fonction de phase de croissance de la plante ainsi que lorgane anatomique trait. Trois ans aprs, Paris et al. en 1976, ont identifi 1,3% de lHE dans les fleurs et 0,7% dans la partie arienne. Zielincka-Sowicka et al. ont identifi dans les feuilles 13 composs constituant 91% de la composition totale (camphre, bornol, isobornol, camphne, carvone, limonne et alphapinne) (Zielinska-Sowicka et al., 1970). Mounfared et al. ont analys lhuile essentielle de la partie arienne sche de la Balsamite provenant dIran (Tanacetum balsamita, L. ssp. balsamitodes (schultz Bip) Grierson [syn. non

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Chapitre I : Etude Bibliographique Chrysantemum balsamita (L.) Wild], 31 composs ont t identifis parmi lesquels la carvone (68%) constitue le compos majoritaire (Monfared et al., 2002). Baser et al. ont identifi la composition de lhuile essentielle ainsi que la distribution nantiomrique de plusieurs espces de Tanacetum parmi lesquelles Tanacetum balsamita(Baser et al., 2001) En 2000 Bylaite et al. ont tudi la variation de la composition de lhuile essentielle de Balsamita major (L.). Desf en fonction des diffrentes phases de croissance et de la partie hydrodistille (feuilles et fleurs) o le rendement en huile essentielle lev a t dtect durant la phase de floraison (Bylaite et al., 2000). On a remarqu quil ny a pas de variation considrable de la composition selon la phase de croissance lexception du dbut de la phase (mai) o le % de carvone est plus faible que celui de la bta thujone. En 2001, Gallori et al. ont analys la composition chimique de lHE et de leau aromatique des feuilles de la Balsamite dorigine Italienne (Gallori et al., 2001), et la carvone a t dtecte comme le compos majoritaire dans les deux parties. Il existe galement des travaux concernant lactivit insecticid de la Balsamite. Une vingtaine de composs actifs ont t identifis dans lHE pour leur forte activit insecticide contre les aphides (Bestmann et al., 1984). Todorova et al. en 1989, ont focalis leurs travaux sur la recherche des flavonodes dans la fraction O-dihydroxyphnolique de Balsamita major o on a identifi 5 composs comprenant les acides cafique, chlorognique et frulique (Todorova et al., 1989). 7 espces de Tanacetum de diffrentes origines gographiques parmi lesquelles Tanacetum balsamita, ont t analyses pour leur potentiel lev en flavonodes lipophiliques et polaires. La partie traite de la balsamite tait les feuilles o on a identifi 5 flavonodes (Williams et al., 1999). Dun autre ct, en 1996, Kubo et al. ont isol partir des fleurs sches de Tanacetum balsamita (Catinga-de-mulata) dorigine brsilienne un compos actif antimicrobien qui sappelle la Tanabaline (Kubo, 1995). En 2003, Nickavar et al. ont isol partir de la partie arienne de la balsamite dorigine Iranienne un flavonol (Nickavar et al., 2003) dont la structure est prsente dans la figure 7.

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Figure 3: structure chimique de 3',4',5,7-Tetrahydroxy flavonol

En se basant sur la nature du terpne dominant on peut identifier 4 chmotypes : type camphre, type carvone, type camphre-thujone et type carvone-thujone.

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Chapitre I : Etude Bibliographique II.3. Calamintha grandiflora : informations botaniques, structurales et culturales

Figure 4: Planche botanique de Calamintha grandiflora (Le rseau de la botanique francophone)

Famille : Lamiaceae Genre : Calamintha Espce : Calamintha grandiflora (L.) Moench

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Chapitre I : Etude Bibliographique II.3.1. Noms et origine Utilis en infusion comme une tisane, le Th dAubrac est la plante la plus rare parmi les plantes slectionnes, Calamintha grandiflora (L.) Moench (Syn.Satureja grandiflora (L.) Scheele) voir les synonymes Melissa grandiflora L., Thymus grandiflorus Scop., Satureja grandiflora (L.) Scheele, Calamintha mariae, le Th dAubrac est une plante connue dans la rgion dAubrac au Massif Central en France. Elle appartient la famille des Labies, de taille (20-60 cm) et dune odeur forte et pntrante particulirement en juillet. Plante vivace de 20-50 cm., verte, poils pais, odeur agrable, souche stolonifre ; tige simple ; feuilles grandes, ovales, long ptiole, limbe plus long que large, fortement dent en scie dents profondes, triangulaires, tales ; fleurs rouge pourpre, trs grandes, peu nombreuses en verticilles carts, pdoncules communs plus courts que les feuilles ; calice long de 12-16 mm., vert, glabrescent, tube droit, poils de la gorge inclus, dents ingales, cilies ; corolle dpassant de 18 mm. La gorge du calice, tube arqu-ascendant ; carpelles ovodes, noirs. Avant les annes 1990 il nexistait pas dtudes chimiques dans la littrature concernant la composition chimique de son huile essentielle (Souleles et al., 1990).

II.3.2. Distribution nationale La distribution gographique de cette labie couvre l'Europe centrale et mridionale. D'aprs Grualbo, il s'agit d'une espce frquente dans le sud-est de la France (Grualbo et al., 1993), depuis le Massif Central jusqu'aux Alpes occidentales, tant aussi prsente dans les Pyrnes orientales et la Corse. Rcemment, Galland et al. ont aussi mentionn une sous espce comme tant prsente en Afrique du Nord (Rif et Atlas moyen) sous le nom de Calamintha grandiflora (L.) Moench subsp. Baborensis (Bali) Galland; les plantes nord-africaines prsenteraient la mme allure que celles d'Europe, mais seraient plus rduites, c'est dire, avec des feuilles, calice et corolle un peu plus courts.

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(Le rseau de la botanique francophone)

II.3.3. Historique de la dcouverte du Th dAubrac dans les Pyrnes Calamintha grandiflora est une espce rare aux Pyrnes, notamment sur le versant mridional. Sa dcouverte prolonge son aire de rpartition d'environ 200 km vers l'Ouest. Peut-tre d'autres citations pninsulaires telles Torrecilla de Alcafiiz (Teruel), Moncayo (Zaragoza), montagnes de Santander, etc. doivent se rapporter des confusions avec les espces du mme genre (Calamintha sylvatica) ou de la mme famille (Melissa officinalis)(Grualbo et al., 1993). II.3.4. Ecologie A peu prs tous les ouvrages consults indiquent la prfrence cologique de l'espce pour les forts ombrages et fraches des tages montagnard et subalpin, surtout htraies; cependant, la plante semble avoir t trouve dans les sapinires et mme les forts de pin crochets. Calamintha grandiflora est une espce rare au

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