13
Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune : utilisation de critères morphométriques et de nouvelles approches protéomiques ncadrants: Pascal Fontaine, Jean-Noël Gardeur, Bérénice Schaerlinger Castets Marie-Dorothée

Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

  • Upload
    zlata

  • View
    18

  • Download
    1

Embed Size (px)

DESCRIPTION

Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune : utilisation de critères morphométriques et de nouvelles approches protéomiques. Castets Marie-Dorothée. Encadrants: Pascal Fontaine, Jean-Noël Gardeur, Bérénice Schaerlinger. Domestication de nouvelles espèces. Approche générique. - PowerPoint PPT Presentation

Citation preview

Page 1: Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

utilisation de critères morphométriques et de nouvelles

approches protéomiques

Encadrants: Pascal Fontaine, Jean-Noël Gardeur, Bérénice Schaerlinger

Castets Marie-Dorothée

Page 2: Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

1

Géniteurs

Œufs

Ovocytes Spermatozoïdes Larves

Domestication de nouvelles espèces

Maîtrise du cycle de vie

Besoin d’indicateurs de qualité – Besoin d’indicateurs de qualité – morphométriquesmorphométriques//moléculairesmoléculaires

Approche générique

Perca fluviatilis

Modification des Modification des performances de performances de

reproductionreproduction

Page 3: Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

Collecte d’ovocytes

Ovocytes non fécondés

Congélation

Analyse protéomique

Protéines d’intérêt ?

Mise au point du protocole

F. Silvestre, Namur

Ovocytes fécondés

Incubation (laboratoire)

Suivi : mesure des caractéristiques

Base de données œufs/paramètres

Classification des œufs / qualité (ACP-CAH)

1. Protocole expérimental

2

Site expérimental de La Bouzule

Page 4: Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

-Géniteurs poids, date de ponte

-Ovocytes diamètre et poids ovocytaire, fragmentation des pontes

-Œufs fécondés Taux de fécondation à 3 jours, Durée d’incubation, Durée d’éclosion, Taux d’éclosion

-Larves Taux de malformation larvaire, Taille des larves à l’éclosion, Taux de survie à 7 jours, Taux de résistance au jeûne

OD

jc

l

2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes

3

Page 5: Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

Starvation tolerance

0.80.40-0.4- 0.8Axis 1

Female weight

Egg weight

Fragmentation rate

Oocyte diameter

Fertilization rate Hatching

rate

Incubation duration

Hatching duration

Malformation rate

Larval size at hatching

Survival rate after 7 days

0.8

0.4

0

-0.4

-0.8

Axis

2

Spawning date

Résultats : Analyse en Composantes Principales – Cercle des corrélations

Axe 1

Axe 2

Axe 3

Variables non impliquées dans des axes

Variables actives

Variables illustratives

Taux de survie larvaire à 7 joursTaux de résistance au jeûne

Taux de fécondationTaux d’éclosion

Taux de malformation larvaire

2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes

4

Page 6: Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

2.25

0.75

0

-0.75

-1.50

15-3

1.50

15-2

15-1

28-1

34-1

37-2

34-3

36-234-2

36-1

36-3

39-1

39-2

37-335-3

35-2

35-1

28-3

22-3

22-16-3

21-2

16-3

16-2

21-3

16-1

27-1

28-2

37-1

21-122-2 6-1

6-2

42-2

42-3

25-125-227-3

27-2

42-1

Mr

HrFer

Lz

Sm

s7d

Ew

Hd

SfOd

FrrId

Sw

Classe A

Classe B

-3 -2 -1 0 1 2

Axis 1

Axi

s 2

2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes

Résultats : ACP + CAH – Classification des pontes

5

Page 7: Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

   Classe A

Bonne qualitéClasse B

Qualité moyenneTaux de survie à 7jours

(%) 93 39

Taux de résistance au jeûne

(dl50; jour) 12 6

Taille des larves à l'éclosion (mm) 5 5

Taux de malformation larvaire (%) 1 4

Mise en évidence de 2 catégories de pontes selon l’ACPMise en évidence de 2 catégories de pontes selon l’ACP

5 à 6 pontes de chaque classe sélectionnée pour une étude protéomique

2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes

Résultats : Caractéristiques des classes

Ajout d’1 catégorie de pontes sans aucune fécondationAjout d’1 catégorie de pontes sans aucune fécondation

6

Classe C

Non Fécondées

Page 8: Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

Std. interne

Ech. 1 Ech. 2

Std. interne

Ech. 3 Ech. 4

Ele

ctr

op

horè

se 2

DEle

ctr

op

horè

se 2

D

Std. interne Ech. 1 Ech. 2

Std. interne Ech. 3 Ech. 4

25µg 25µg

25µg 25µg

3. Etude protéomique des ovocytes

Technologie 2D-DIGE : Principe

27.5µg

27.5µg

7

Page 9: Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

367

701 715

482

10291032

707

1469 14631406 1334

16811717

1660

1742 16831792

16101472

1953

1969

2399

2325

24742454

270827822835

2875

2252

2137

2447

20

30

50

40

60

70

80

90

Mr (kD

al)

4 7pI (pH units)5 6

3. Etude protéomique des ovocytes

Résultats : spots d’intérêt (variation d’abondance intergroupe – p<0.05)

34 spots dont 34 spots dont l’expression varie l’expression varie selon les groupes de selon les groupes de pontespontes

8

Page 10: Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

34 36 28 37 39 41 35 40 20 33 26 6 22 21 25 38-0.2 0 0.2

BQMQNF

11-2

1-1

16601717247424541742232517922270270827822835287521373672399707482168170171514061610

1469

146314411683

1029

19531472

2447

13341969

1032

2252

AA

BB

CC

DD

Bonne QualitéNon FécondésQualité Moyenne

3. Etude protéomique des ovocytes

Résultats : Classification spots/oocytes

9

2

Groupe C

Groupe A

Groupe D

Groupe B

Qualité Moyenne

Non Fécondés

Bonne Qualité

+

4 groupes :QM NF BQ

Page 11: Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

0

2

4

6

8

10

12

1 2 3 4

Prot

ein

Num

ber

Stress

Oxydative stress

Proteins degradation(proteasome)Energetic metabolism

Biosynthèse AA, AN

Cytoskeleton, celldivision Other

I mplied in severalfonctionsNot defi nite

Groupe A

Groupe D

Groupe B Groupe C

QM NF BQ

Inhibition de l’expression

Activation de l’expression

- Classification des fonctions biologiques- Classification des fonctions biologiques

10QM NF BQ NF

3. Etude protéomique des ovocytes

Résultats : Identification des spots par spectrométrie de masse MS/MS

- 19 spots identifiés / 34- 19 spots identifiés / 34

Page 12: Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

Protéines du Stress oxydatifGroupe

AProtection cellulaire contre les espèces réactives de l’oxygène

Protéines du StressGroupe B

Protéines chaperonnes + protection des protéines lors d’un stress

3. Etude protéomique des ovocytes

Perspectives : Protéines/fonctions potentiellement intéressantes

Biomarqueurs potentiels de qualité Biomarqueurs potentiels de qualité 11

Ovocytes Ovocytes Non Non

FécondésFécondés

Ovocytes Ovocytes Qualité Qualité

MoyenneMoyenne

Page 13: Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

Merci de votre attention.

12

Remerciements :

Equipes de l’Université de Notre Dame de la Paix (Namur) : -Frédéric Silvestre, Patric Kestemont, URBO -Edouard Delaive, Marc Dieu, URBC

Equipe de l’UR.AFPA :-Yannick Ledoré, Alain Iuretig, Awatef Trabelsi, Kevin Debes