ADN et génotypage

Atelier Paludisme - IPM - 2007

ADN ET GENOTYPAGE

Razafinjato CélestinINSPC ANTANANARIVO

MADAGASCAR

EVALUATION

par les FACILITATEURS


PLAN

• Définition et historique

• Rappel sur la structure de l’ADN

• Diversité

• Outils de génotypage � Hybridation

� Séquençage

� PCR

� RFLP

• Paludisme et génotypage

• Conclusion


Définition et historique (1)

• Acide désoxyribonucléique (ADN) : hérédité.

• Watson et Crick- 1953

• ADN: le support de l'information génétique :

• longues molécules agglomérées sous forme de

CHROMOSOMES

• Unité d’information(transcription) = gène.


Définition et historique (2)

• Ensemble gènes = génome

• Génotype: forme allélique d’un gène(jeu de gène ).

• ADN = diverses formes.

• Génotypage = technique pour différencier les génotypes.


Rappel sur la structure de l’ ADN (1)

• La biologie moléculaire permet d’explorer l’ADN par

diverses méthodes.

• Sa structure moléculaire

– sorte d'échelle constituée de 2 brins;

– une double chaîne de nucléotides en forme

hélicoïdale.


Rappel sur la structure de l’ ADN (2)

L'ADN = 3 éléments:• un groupe phosphate• un sucre, le désoxyribose• Les quatre nucléotides, sous-unités de l'ADN: 2 groupes de

bases azotées :

– les bases PURIQUES: guanine (G) et adénine (A), – les bases PYRIMIDIQUES: cytosine (C) et thymine (T).


Rappel sur la structure de l’ ADN (3)La synthèse de l’ADN

� Les protéines sont assemblés à partir des acides aminés en

fonction de l’information présente dans les gènes.

� 2.Etapes:

� Transcription

� Traduction

Chaque étapes a 3 phases:– Initiation – Élongation– terminaison

• bases azotées attachées / liaisons faibles. � cassées par une

enzyme l'ADN polymérase thermostable � la chaîne ouverte � 2

ADN (2 brins nouvellement formés)..


http://fr.wikipedia.org/wiki/Image:R%C3%A9plicationdelADN.png


Diversité (1)

• Le développement des techniques de biologie a permis

la mise en évidence d'une très importante variabilité de

l'ADN = polymorphisme.

• Le polymorphisme génétique a été défini comme

l'existence, dans un même génome, d’un gène sous

deux ou plusieurs formes alléliques.


Diversité (2)

Génération du polymorphisme

– Mutations ponctuelles.

– Délétions et duplication.

– Conversion génique.

– Insertions de séquences mobiles.

– L'excision de boucles chromatiniennes.

– Le glissement intra-chromatidien (VNTR).

– Recombinaisons.


Outils de génotypage (1)

• Hybridation:

– technique particulière d’hybridation moléculaire qui

permet de déterminer la ressemblance entre les séquences de deux brins d’ADN que l’on veut

comparer.

– Degré de parenté

• Séquençage:fragmentation d’un génome et vérifier l'ordre d'enchaînement des nucléotides de l’ADN: détection

des maladies génétiques.



PCR ou réaction de polymérisation en chaîne de l’ADN

la production de grandes quantités de l ’ADN en utilisant

une réaction enzymatique.

• l 'amplification in vitro de l'ADN.

• technique est basée sur la combinaison de 2 facteurs :

les propriétés de synthèse enzymatique et d’initiation.

• analyse quantitative et qualitative pour la détection du

polymorphisme génétique.

• utilisé en général pour diagnostic.


Outils de génotypage (3)RFLP ou polymorphisme de longueur des fragments de restriction:

• Couper l'ADN en morceaux, à l'aide d'enzyme de restriction :

– pour distinguer les unes des autres les molécules d’ADN,

– technique de laboratoire pour différencier ou comparer des

molécules d'ADN = empreintes génétiques et dans les tests de

paternité

séparation des fragments de restriction

ÉTAPES DE LA TECHNIQUE RFLPextraction de l'ADN

hydrolyse de l'ADN

Dénaturation de l'ADN transfert sur membrane

renforcement de la fixation



L’application :

� Diagnostic.

� Thérapie.

� Dépistage systématique.

� Médecine légale: Typage d’un individu, recherche criminelle, test

de paternité.

� Organismes génétiquement modifiés en agronomie: plantes;Les

animaux.


Le génotypage permet:

� de déterminer l’efficacité thérapeutique (recrudescence

et nouvelle infection).

Ex: MSP 1- MSP2 ( PCR, hybridation, RFLP) .

� de diagnostic pour le traitement adéquat.

� analyse épidémiologique moléculaire (prévalence de tel

ou tel allèle ou génotype dans une région donnée).

� de guider de stratégies de lutte contre le paludisme.

� indicateur pour évaluer les programmes de lutte contre

le paludisme (diminution des clones parasitaires).

Paludisme et génotypage


Conclusion

Génotypage :

– Diverses techniques puissantes.

– Amélioration de notre connaissance.

– Un outil très utile à la gestion de la santé de la population.

– Bon diagnostic pour traitement adéquat.

– Moyen de lutte efficace


Référence

• http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/genophenotype/phenotype.html

• http://www.cns.fr/externe/Francais/Presentation/ADN_historique.ht

ml

• http://wcentre.tours.inra.fr/sfpar/bulletin/2000/affiches/thellier.htm

• http://www.pathexo.fr/pdf/Articles-bull/2004/2004n4/T97-4-2648-

2p.pdf

• http://fr.wikipedia.org/wiki/Adn

• http://www.proadn.com/fr/communique_communique_18


Health & Medicine

ADN et génotypage