Abdsalah

Sérodiagnostic de Widal-Félix

(Méthode par centrifugation)

Par : S / Abdessemed

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Principe :

• Des dilutions croissantes de sérum sont mises en présence des suspensions « O » (alcoolisées) et « H » (formolées) de Salmonella typhi, de salmonella para typhi A,B et C et éventuellement de salmonella typhi –murium et Salmonella enteritidis ou de suspension « Vi ».

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• Ceci permet la mise en évidence dans le sérum du sujet d’agglutinines O correspondant à l’antigène somatique et d’agglutinines H correspondant à l’antigène flagellaire.

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Réactifs :

Soluté physiologique à 8. gr/l ClNa

Suspension antigéniques «O »et « H »

- de Salmonella typhi

-de Salmonella paratyphi A

-de Salmonella paratyphi B

-de Salmonella paratyphi C

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Suspension « H »

-de Salmonella enteritidis

-de Salmonella typhi-murium

Suspension Vi de salmonella typhi

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Mode opératoire :

Méthode qualitative :• Technique par centrifugation :• Préparer des dilutions au 1/10 et au 1/20

des sérums à examiner, en solution de ClNaà 8.5 g/l :-dilution au 1/10 : 0.2 ml de sérum + 1.8 ml

de ClNa-Dilution au 1/20 : 0.1 ml de sérum+1.9 ml

de ClNa• Préparer la galerie suivante :

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N° des tubes

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

sérum au 1/20 (ml)

- 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1

sérum au 1/10 (ml)

0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1 -

Ajouter les suspensions antigéniques

TO0,9

TO0,9

TH0,9

TH0,9

AO0,9

AO0,9

AH0,9

AH0,9

BO0,9

BO0,9

BH0,9

BH0,9

Dilution……

1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200

Centrifuger 5 mn à environ 3000 tours/mn. Lecture après remise en suspension par une chiquenaude

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• Méthode quantitative :

• Préparer les dilutions suivantes de sérum :

NaCl (ml)Sérum(ml)

1.80.2

1.01.0

1.01.0

1.01.0

1.01.0

Dilutions obtenues…….

1/10 1/20 1/40 1/80 1/160

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• Pour chaque suspension réaliser la galerie suivante, à l’aide des dilutions de sérum :

Dilution du sérum…

1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 Témoin antigène

sérum dilué (ml)NaCl ( ml )suspension antigénique....

0.1-0.9

0.1-0.9

0.1-0.9

0.1-0.9

0.1-0.9

-0.10.9

Dilution finale.. 1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600

Centrifuger 5 mn à environ 3000 tours/mn. Lecture après remise en suspension par une chiquenaude

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Lecture :• Les témoins antigène sont troubles de

façon homogène.• Si le sérum contient des agglutinines » H

« correspondant à l’une des suspensions on observe une agglutination floconneuse facilement dissociable.

• Si le sérum contient des agglutinines » O » correspondant à l’une des suspensions, on observe une agglutination fine, granulaire, difficilement dissociable.

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Interprétation :

• Dans les fièvres typho-paratyphoidiques, les agglutinines « O » apparaissent vers le 8e jour de la maladie, les agglutinines » H » vers le 10-12 jour.

• A la période d’état, il y aura donc simultanément des agglutinines anti O et anti H, ces dernières atteignant un titre plus élevé.

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• Il faut prélever au moins deux échantillons de sérum, espacés de 7 à 10 jours. Une élévation du taux des agglutinines est le signe d’une infection en cours.

• L’interprétation des résultats sur un seul prélèvement est difficile et nécessite la connaissance des antécédents de vaccination du malade et de l’évolution de la maladie.

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• Les titres élevés contre les antigènes » O » sont considérés de plus grande signification que les titres contre les antigènes « H », car les anticorps anti O disparaissent plus vite après immunisation.

• Cependant, un traitement précoce du malade par du chloramphénicol et les corticoïdes peut empêcher l’apparition dans son sérum des agglutinines » O ».

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• L’interprétation des résultats nécessite aussi la connaissance des parentés antigénique existant entre les différentes espèces de Salmonelles.

• Par exemple Salmonella enteritidis a des antigènes « O » en commun avec Salmonella typhi ;

• Salmonella typhi-murium à des antigènes « O » en commun avec Salmonella para B.

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• Pour confirmer ou éliminer l’hypothèse d’une infection due à ces germes,

• il faudra rechercher les agglutinines «H » anti Salmonella enteritidis ou Salmonella typhi-murium.

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• Les agglutinines « Vi » sont présentes dans le sérum de 80 à 90 % des porteurs de Salmonella typhi, et chez 5 à 10 % des individus normaux. L’intérêt de leur recherche est donc limité aux enquêtes épidémiologiques.

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