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+ 45 kDaEnvironnement, exposition, sensibilisation allergique :
Etude analytique d’un modèle de pollen de cyprès en Méditerranée1- ESPCI ParisTech, PECSA, UMR 7195 CNRS, Paris, France; 2- Unité d’Immunologie, Autoimmunité et Hypersensibilité, Hôpital Bichat-Claude Bernard, Paris, France ; 3- Center of Molecular Allergology,
IDIIRCCS, Rome, Italy, 4- Hôpital Nord, Marseille, France
Y Shahali; LSABM, ESPCI-ParisTech, 24 novembre 2011
Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011 1
Allergie au pollen de Cupressacées dans le monde
E Scala et coll. 201023,077 patientsISAC 75 allergènesCup a 1: 43%
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Source: RNSA 2003
Les risques allergiques en France
Source: INRA 2010
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Pollen de cyprès: aspects particulaires
Pollen: 20-24 µm de diamètre
fragilité de l’exine
Orbicules
Micrograph of an Arizonica cypress pollen Shahali et al. 2007, 2009
Orbicule: 300-600 nm de diamètre
5 µm
300 nm
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Exposition expérimentale du pollen de cyprès au NO2Etude en collaboration avec le PC2A "Physicochimie des Processus
de Combustion et de l'Atmosphère", Université Lille 1.
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Extraction aqueuse
excy
in
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Sen
sib
ilisa
tion
Sen
sib
ilisa
tion
dégranulationdégranulation
symptômes cliniquessymptômes cliniques
Ag
APC
1er contact 1er contact antigéniqueantigénique
Th2 IL-4
IL-13Be IgE
cytokines
leukotriènes
PAFprostaglandines
enzyme
2e contact2e contactantigéniqueantigénique
Ag
HISTAMINE
chemokines
mastooubaso
IgE du sérum, spécifiques des
allergènes auxquels le patient est sensibilisé
1 – évaluer le répertoire des allergènes
2- évaluer le répertoire des IgE des patients allergiques
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Mécanisme de l’allergie et identification des allergènes
Différentes extractions des protéines du pollen
1975*TUC
1496SDS
150.5PBS
91H20
µg de protéine par gr de pollen
méthodesd’extraction
1.7
10
17
21
Ratio
*2 M Thiourea, 7 M Urea, 2% CHAPS
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1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
Serums anti-HMW Serums anti-14 kDa
Criblage en SDS-PAGE 1-D avec un extrait SDS
Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011 9
H2O4.
45 5.1
6.0
6.5
7.0
7.5
8.0
9.6
- 94 - 67
- 30
- 20
- 43
- 14.4
- 94 - 67
- 30
- 20
- 43
- 14.4
pI
kDa
kDa
4.45 5.1
6.0
6.5
7.0
7.5
8.0
9.6
1
1
3
12
3
1 1
a
b
c
d2
pI
PBS
Electrophorèse 2-D sur des extraits polliniques
Cup s 1
Cup s 1PG
?
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Cinétique d’extraction des protéines du cyprès de Provence en PBS
kDa
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30.5% 25%16.6%23.3%
- 94 -
- 67 -
- 43 -
- 30 -
- 20.1 -
- 14.4 -
30 29 28 27 26 25 24 23 22 21 20 19 18 17 16 15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36
negative negativeBP14 BP14
60.1% 44.5%
HMW HMW
Comparaison de la réactivité IgE aux protéines du pollen de cyprès de Provence chez les patients Italiens et Français
kDa
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Allergène de 14 kDa fortement exprimé dans le pollen de Cupressus sempervirens
Cyprès d’Arizona Cyprès de ProvenceCa Cs
9494
67
45
30
20.114.4
kDa
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L’importance des conditions d’exposition et de l’espèce sensibilisante
L’apport de la biochimie analytique et de l’allergologie moléculairel’étude du répertoire des allergènesL’analyse de la diversité de la réponse allergique (pollen, moisissures, acariens, aliments…)
Le pollen de cyprès est une source importante de fines particules submicroniques
Optimisation de l’extrait de pollen de cyprès utilisation de détergents et d’agents chaotropiques Révélation de nouveaux allergènes
Deux profils d’immunoréactivité allergènes de haute masse moléculaire allergène de 14 kDa
CONCLUSION
Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011 14
Pascal PONCETJean-Pierre SUTRAGabriel PELTREHélène SENECHALESPCI ParisTech, LSABM
Denis CHARPINHôpital Nord de Marseille
Sylvie CHOLLET-MARTINPascale NICAISEINSERM U996, Paris
Adriano MARICMA, Rome, Italy
Iman HADDADEmmanuelle DEMEYJoëlle VINHESPCI ParisTech, LSMBP
Laurence GUILLOUXBiomnis, Lyon
Philippe CHAFEYICGM, Paris
RemerciementsRemerciements
