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GÉLOSE AU CÉTRIMIDE

1. Contexte d’utilisation Isolement sélectif de Pseudomonas aeruginosa.

2. Composition (g/L) milieu incolore

Source de N et de C Peptones 26,0

Bromure de tétradonium (cétrimide1) 0,2 Inhibiteurs

Acide nalidixique (présence facultative) 0,015

Sulfate de potassium (K2SO4) 10,0 Éléments minéraux

Chlorure de magnésium (MgCl2) 1,4

Gélose Agar 10,0

pH = 7,1

3. Lecture La présence de cétrimide et d’acide nalidixique (antiseptiques), sans action sur Pseudomonas aeruginosa,

permet son isolement sélectif.

Sélection renforcée par une incubation à 41 °C.

Stimulation de la production de pyocyanine (coloration bleue) grâce au chlorure de magnésium et au

sulfate de potassium.

Si présence de colonies bleu-vert avec fluorescence sous UV (à 254 nm) :

Colonies suspectes de Pseudomonas aeruginosa

Culture possible de Serratia, Klebsiella et Acinetobacter

Bibliographie : http://lycee-valin.fr/bgb/ftech/C1K.pdf

1 Cétrimide : nom de la forme pharmaceutique Cetavlon® : molécule de la famille des ammoniums quaternaires, antiseptique bactériostatique non bactéricide, actif essentiellement sur les germes Gram + et inactif sur les Pseudomonas.

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MILIEUX KING A ET KING B

1. Contexte d’utilisation Les milieux de King (milieu King A et milieu King B) permettent de différencier entre elles les différentes espèces du genre Pseudomonas, par la mise en évidence de la production de pigments spécifiques.

L’élaboration des pigments est influencée par la composition du milieu, ce qui justifie l’utilisation de deux milieux différents.

2. Composition (g/L) milieu incolore

3. Ensemencement Ces milieux se présentent en tube avec pente et culot. L’ensemencement de la pente s’effectue par stries. L’incubation du tube s’effectue bouchon dévissé afin de favoriser une bonne oxygénation des germes

aérobies stricts mis en culture pendant 24 à 72 h à 30°C.

4. Lecture

4.1. Milieu King A Observation d’une culture bleue mettant en évidence la production de pyocyanine.

Pseudomonas aeruginosa ainsi que d’autres espèces produisent de la pyocyanine.

4.2. Milieu King B Observation d’une culture jaune-vert mettant en évidence la production de pyoverdine.

Cette molécule présente une fluorescence à 340 nm.

Pseudomonas aeruginosa, Ps. fluorescens, Ps. putida,… produisent de la pyoverdine.

King A King B

Peptones dites « A » 20,0 Source de C et de N

Peptones dites « B » 20,0

Source de C Glycérol 10,0 10,0

Sulfate de potassium (K2SO4) 10,0

Chlorure de magnésium (MgCl2) 1,4

Hydrogénophosphate de potassium (K2HPO4)

1,5 Éléments minéraux

Sulfate de magnésium heptahydraté (MgSO4,7 H2O) 1,5

Gélose Agar 12,0 12,0

pH = 7,1 = 7,2