kchange de signaux entre E coli en&o- pathogkes et cellules 6pith6liales de l’h6te

llan Rosenshine

La plupart des souches de E co2i sont non pathogenes et sont presentes dans la flore intestinale normale. D’autres souches sont pathogenes et peuvent causer des infections de la vessie, des meningites ou des diarrhees. Les sympt8mes causes par ces souches vont du type diarrhee chokiforme, jusqu’a la colite extr6me. Chaque classe de E coli diarrhegenique possede un groupe distinct de facteurs de virulence, incluant des adhesines et des invasines specifiques et/au des toxines, qui sont responsables d’un type specifique de diarrhee.

DBparlements de gMtique mol&.xlaire et de biotechnologie, universit6 hbbrai’que, Facuk de mhdecine, POB 12272, JBrusalem 9112, Israll.

L es EPEC ont ete les premieres Escherichiue a @tre identifiees en tant qu’agents causant la

diarrhee [51. Elles ont ete definies ulterieurement comme des E coli appartenant epidemiologiquement a des serogroupes pathogenes, mais dont le mkcanisme de viru- lence n’est pas lie a l’excretion d’en- terotoxines typiques de E coli. Les EPEC causent une diarrhee aqueuse persistante, qui peut con- duire a la deshydratation, voire a la mort. Vomissements et fievre ac- compagnent generalement la perte de fluide. Les EPEC sont la cause mondiale predominante des diar- rhees infantiles. Dans les pays de- veloppes, il s’agit de cas sporadi- ques de diarrhee dans les creches et les garderies [321. En revanche, les EPEC constituent une menace endemique majeure pour les en- fants de moins de 6 mois dans les pays en voie de developpement. Dans ces pays, la diarrhee neonatale due aux EPEC est encore la cause dune mortalite elevee [25,381.

La morphologie des cellules infectkes par EPEC Les EPEC ont deux formes d’atta- chement a la cellule hate. La pre- miere a ete nommee (< liaison ini- tiale H (initial binding) et est produite par l’intermediaire de pili qui for- ment des faisceaux (bundle forming pili, BFJ?). Les BFP causent egale- ment l’agregation des EPEC et la formation de microcolonies a la sur- face de la cellule h&e [7, 161. Les batteries qui se sont attachees par l’intermediaire des BFP se trouvent a une distance de 100 a 300 nm de la membrane de la cellule h&e. La se- conde forme d’attachement est la

ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR / actualit& (1997) 8,2,157-161 0 Elsevier, Paris

<< liaison intime j) (intimate at- tachment) produite par l’interme- diaire d’une proteine de la mem- brane externe des EPEC, l’intimine [211. La distance entre la membrane externe des EPEC et la membrane de la cellule h8te n’est plus que d’environ 10 nm. Un autre aspect morphologique distinctif de l’infection lpar les EPEC est la formation de lesions (A/E : attachement et effacement) des cellules epitheliales infectees [301. La formation de ces lesions est associee & une destruction locale des microvilli de la bordure en brosse et a l’assemblage de structu- res hautement organisees du cytos- quelette, sur les cellules epitheliales a l’endroit oti les batteries sont inti- mement attachees 1241. Ces structu- res, initialement planes, evoluent en longues tiges riches en actine, qui s’etendent jusqu’a 10 nm au-dessus de la surface cellulaire et forment des piedestals sur lesquels reposent les cellules EPEC [35, :36]. Ces pie- destals peuvent devenir plus longs ou plus courts, tout en restant fixes sur place, sur la surface cellulaire. Ces tiges d’actine peuvent egale- ment faire se mouvoir le long de la surface cellulaire les EE’EC extracel- lulaires attachees, a une vitesse pouvant atteindre 0,07 mm/s [361. Apres une infection prolong&z, les cellules h&e s’arrondissent, se deta- chent et meurent 131. Plusieurs autres pathogenes, tels que les EHEC, Hafiiu alvei, REDC-1 (un EPEC specifique du lapin) et Citrobacter rodantium ca.usent des le- sions du type A/E, de morphologie semblable a celles provoquees par les EPEC [9]. De plus, tous ces pa- thogenes possedent le fragment

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chromosomique unique de 35 Kbp qui, chez les EPEC, contient tous les

quement lies et pourraient repre- senter des manifestations morpho-

genes necessaires a la formation de logiques differentes de processus ces lesions 1281. biochimiques voisins 1331. Helicobncfer pylori, agent causal des gastrites, des ulceres gastriques et du cancer de l’estomac, cause egale- ment des lesions t&s semblables a celles induites par les EPEC [37]. Cependant, on ignore encore si Hpylori utilise la meme strategic pour induire la formation de ces le- sions A/E. Environ 1% des EF’EC attaches enva- hissent les cell&s epith&ales infect&s 1331. Comme l’attachement des EPEC est tr+s efficace, le taux d’invasion est eleve, comparable 21 celui des Salmonel- lu ou a Yinvasion m&See par Yinvasine de certaines souches de Yersinia. On observe generalement les EPEC intracellulaires dans un reseau de grandes vacuoles, en contact intime avec la membrane qui les entoure, ne croissant pas ou croissant tres lentement. Les EPEC peuvent pen& trer dans des monocouches polari- sees de lignees epitheliales en les envahissant par le pole apical et en ressortant par le c&e basolaMral[61. L’invasion et l’induction des lesions A/E sont des phenotypes geneti-

L’architecture moltkulaire des pibdestals induits par les EPEC

Les piedestals induits par les EPEC sont composes de filaments d’ac- tine et de plusieurs proteines se liant a l’actine. Differents compo- sants ont ete decrits : la base du pie- destal est riche en myosine et en tropomyosine 127, 361, tandis que les filaments d’actine, la villine et l’a-actinine sont distribues unifor- mement dans les piedestals [12,24, 361. Une bande mince au sommet de la structure est riche en proteines tyrosine-phosphorylees, dont la proteine Hp90, associee a la mem- brane. Le domaine extracellulaire de Hp90 interagit directement avec l’adhesine des EPEC, l’intimine 1351, alors que le domaine intracel- lulaire de Hp90 est associe aux fila- ments d’actine (figure 1). Ainsi, Hp90 tyrosine-phosphorylee pour- rait fournir un lien physique entre les EPEC extracellulaires et les fila- ments d’actine du cytoplasme de la

cellule h&e. On a egalement rap- Porte des concentrations elevees d’ezrine, de plastine et de taline dans les piedestalsIl21, sans que la distribution de ces proteines dans les piedestals ait 6th examinee.

Transduction de signal induite par les EPEC dans Ies cellules infectkes

Afin d’induire la formation des le- sions A/E et d’envahdr les cellules, les EPEC doivent communiquer avec des composants internes de la cellule h&e. En fait, plusieurs si- gnaux ont ete detect& a l’interieur des cellules infectees par les EPEC. Ce sont : i) la tyrosine-phosphoryla- tion de plusieurs proteines de l’hote, surtout celle de Hp90, la pro- teine de 90 kDa associee a la mem- brane (Hp90) [33] ; ii) la generation d’un flux d’inositol phosphates (IP), comprenant les inositol mono-, di- et triphosphate (IP3) [13] ; iii) une augmentation de la concentra- tion de Ca2+ intracellulaire [4] ; IV) une serine-threonine phosphoryla- tion de plusieurs proteines, dont la chame leg&e de la myosine (LCM) [27]. Les etudes men&s par divers

A B EPEC

F@ure 1. Modele d’inieracbon entre les EFEC et la cellule b&e epitheliale. Les EPEC s&relent des Esps et sont responsables de la translocation dEspB, etpeut-etre d’autres Esps dans le cytoplasme de Mote (A). Cela active une yrosine kinase (?Pw de l’hote qui phosphovle Hp90. HP90 possede un site de liaion a fintrmrne. Le compexe rntrmrne-HP90 amorce une cascade ois transductton de srgnaux qui comprend Iactivation de la phospho@ase C ; elle engendre des flux o’lP et de C& et l’activation de krnases C& -dependantes, y compns la LCMkinase. Ces evenements conduisenta l’attachement inime des EPECa la cellule Me et a la formation, sous les EPEC attaches, dune protrusion nkhe en actrne ayant la HP90 phosphorylee a son sommet et la myosrne et tropomyosrne a sa base (B).

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groupes ont conduit a proposer la cascade de signaux, repmsentee par la figure 1A durant l’infection par les EPEC. Le premier evenement semble @tre la tyrosine phosphorylation de Hp90. A son tour, cet evenement active la phospholipase C et g&&e le flux d’Il? L’accroissement de la concentration d’IP3 provoque la li- beration d’ions Ca2+ provenant des reserves intracellulaires qui condui- sent a l’activation de kinases depen- dant du Ca2+ y compris de la LCM kinase qui phosphoryle la LCM. Outre ces signaux, l’ouverture de canaux membranaires non identi- fies dans les cellules infectees a ete rapportee [6,41]. Le role et la signi- fication de l’ouverture de ces ca- naux dans la formation des lesions A/E ne sont pas clairs. Hp90 tyrosine phosphorylee sem- ble etre concentree au sommet du piedestal [351. Le sommet du pie- destal est egalement le site oti se produit probablement la polymeri- sation de l’actine [36]. 11 est ainsi possible que la proteine Hp90 tyro- sine phosphorylee soit etroitement et peut-&re directement impliquee dans l’induction de la polymerisa- tion de l’actine. Les flux d’IP et de Ca2+ intracellulaire, ainsi que l’acti- vation des kinases Ca2+ dependan- tes, peuvent egalement jouer un role dans l’assemblage de cette structure du cytosquelette. 11 est int&essant de constater que la formation de cette structure d’actine est insensible a la toxineToxB de CIostridium dificik et a la compactine (nos n&hats, non publies). Ces deux composes causent l’inactivation de petites proteines liant le GTP, telles que Cd&!, Rho et Rat. Ces trois der- nieres proteines sont impliquees dans l’assemblage de la plupart des autres structures d’actine des cell&s de mammiferes, contrairement a ce qui se passe dans la structure d’actine induite par les EPEC [31 I.

Composants des EPEC impliqutk dans la formation des l&ions A/E L’induction de la polymerisation de l’actine pour former les piedestals,

celle de la phosphorylation de Hp90 et de LCM, celle du flux de IF’ et l’invasion, evenements qui tous, concourent a la formation des I& sions A/E, sont des phenotypes ge- netiquement lies [8,14,18,33]. Tous les genes necessaires pour engen- drer ces phenotypes sont regroup& au locus d/effacement des enterocy- tes (LEE) 1281. Ce locus de 35 Kbp forme un element genetique prob- ablement acquis par les EPEC par transfert genetique horizontal. LEE forme un ilot de pathogenicite inse- re dans le gene sel[28]. Des souches de laboratoire de E coli transfor- mees a l’aide d’un cosmide conte- nant l’element LEE complet, indui- sent l’induction de la polymerisa- tion de l’actine, la phosphorylation de Hp90, la formation de piedestals et celle de lesions A/E identiques a celles induites par les EPEC [29]. Plusieurs classes de genes LEE ont ete d&rites. Le premier groupe comprend au moins neuf genes co- dant pour des composants de l’ap- pareil de secretion des proteines EPEC (les genes sep, dont certains etaient connus sous le nom de genes cfm> 191. Ces genes cadent pour des composants du systeme de s&r& tion du type III [20]. Les proteines s&r&es par ce systeme sont co- dees par les genes esp (EPEC secreted proteins). Au moins trois genes esp ont ete decrits, espA, espB, espD [9, 11,231. Des resultats r&cents de notre labo- ratoire indiquent que l’expression et la secretion d’EspB sont forte- ment induites au contact de la cel- lule h&e, par un mecanisme mole- culaire qui reste a definir. En utili- sant le gene rapporteur adenylate cyclase (AC) [401, nous avons de- montre que les EPEC peuvent effec- tuer la tranlocation de la fusion EspB-AC dans la cellule h&e. Des EPEC mutes dans sepA, sepB et dans d’autres genes sep sont incapables de secreter EspA, EspB, EspD, ou d’effectuer la translocation EspB- AC ([14,23], nos resultats, non pu- blies). Ces mutants esp ou sep sont incapables d’induire la transduc- tion de signaux dans la cellule hbte (ie, la phosphorylation de Hp90 et

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de LCM et l’induction de flux de IP 113, 18,331. Par consequent, ces mutants ne pro- voquent pas de lesions A/E et ne sont pas invasifs. Les signaux de- pendent du contact des EPEC avec la cellule infectee et ne SOnt pas pro- duits par le surnageant de culture des EPEC riches en proteines ESP solubles. Cela indique ‘que la trans- location de EspB, et peut-etre d’au- tres ESPs dans le cytoplasme de la cellule hate, necessite l’attachement des EPEC pour initier la cascade de signaux de transduction. Le proces- sus de translocation peut impliquer la formation de canaux dans la membrane de la cellule h&e [6,41] comme dans le systeme homologue de translocation de Yersinia [19]. Pour conclure, une activite concer- tee des proteines Esp et Sep est ne- cessaire pour engendrer des lesions A/E. L’elucidation de la fonction biochimique de ces proteines est la cle de la comprehension de la viru- lence des EPEC. Le gene eae a ete le premier du groupe LEE a avoir ISte identifie 1211. 11 code pour l’intimine, une proteine de la membrane externe homologue de l’invadne des sou- ches de Yersinia. Comme l’invasine, l’intimine est une adhesine qui cause l’attachement intime des EPEC, et est par consequent impli- q&e dans l’invasion [8,21 I. In vitro et in vivo, l’intimine s’associe speci- fiquement a un domaine de Hp90 phosphorylee expose en surface, mais non a la protein’e non phos- phorylee. Des etudes in vitro ont identifie les integrines, ligands de l’invasine, comme un ligand sup- plementaire de l’intimine 1151. Ce- pendant, l’expression de l’invasine chez les EPEC ne complemente pas les mutants eae 1351. Ainsi, le role de la liaison de l’integrine a l’intimine reste a definir. Les mutants eae des EPEC ne se lient pas a l’Hp90 tyro- sine phosphorylee, ne forment pas d’attachement intime a la cellule hate, ne causent pas l’organisation en piedestal de l’actine polymerisee 121, 331. Par consequent, ces mu- tants, qui ne forment pas de piedes- tals, sont moins invasifs 18, 351 ; ils elicitent encore toutefois la trans-

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duction de signaux, une polymeri- sation diffuse de l’actine et la d&e- nerescence des microvilli de la bor- dure en brosse 18,351. De plus, ces mutants cue s’attachent encore a la cellule h&e par les BIT et peut-@tre par d’autres adhesines. En accord avec ces observations, les mutants cue causent encore une ma- ladie chez des volontaires humains. Celle-ci est cependant attenuee si on la compare a la maladie causee par la souche sauvage isogenique [lo]. Les BFR responsables de l’attache- ment initial des EPEC, en sont le facteur d’attachement majeur 1161. La biogenese des BFP est codee par un amas de 14 genes (les genes .Q7), sit&s sur un grand plasmide de 50 a 90 kbp 139, 421. Un deuxieme groupe de genes se trouve sur le meme plasmide ; ces genes per re- gulent positivement l’expression des genes bfp, cue, et es@ 117, 431. Les genes bfp et per ne sont pas es- sentiels pour l’induction des lesions A/E par les EPEC ; toutefois, les deux groupes de genes activent for- tement la formation de ces lesions.

Remerciements Le travail effect& dans le labora- toire de Ban Rosenshine a beneficie de subventions de 1’Academie des sciences d’Israe1, de la Fondation binationale Israel-Stats-Unis et du minis&e israelien de la Sante.

Rbfkrences Adam T, Arpin M, Prevost MC, Gou- non P, Sansonetti PJ (1995). Cytoske- letal rearrangements and the functio- nal role of T-ulastin during entrv of ShigelIa flex&i into HeLa &lls. J’CelZ Biol 129, 367-381 Andrade JR (1996). Invasion by EPEC. Rev Microbioi 27, 63-66 Baldwin TJ, Lee DMB, Knutton S, Williams PH (1993). Calcium-calmo- dulin dependence of actin accretion and lethalitv in cultured HEu-2 cells infected with enteropathogen~c Esche- richia coli. Inject Immun 61, 760-763 Baldwin TJ, Ward W, Aitken A, Knut- ton S, Williams PH (19911. Elevation of intracellular free calcium levels in HEo-2 cells infected with enteroua- thogenic Escherichia coli. infect Im&n 59, 1599-1604 Bray J (1945) Isolation of antigenically homogeneous strains of Bact. coli neo-

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

politanum from summer diarrhoea of infants. J Pathol Bacferiol 57, 239-247 Canil C, Rosenshine I, Ruschkowsk IS, Donnenberg SM, Kaper BJ, Fin- lav BB (1993) Enterouathogenic Es- chkrichia coli decrease’s the Transepi- thelial electric resistance of infected polarized epithelial monolayers. In- fect Immun 61. 2755-2762 ‘Donnenberg MS, Giron IA, Nataro JE Kaper JB (‘i992) A plasmid-encoded typ IV fimbrial gene of enteropatho- genie Escherichia coli associated with localized adherence. Mel Microbial 6, 3427-3437 Donnenberg MS, Calderwood SB, Do- nohue RA, Keusch GT, Kaper JB (1990) Construction and analysis of TnphoA mutants ofenteropathoaenic Es- ch&ichia co/i unable to invad”e HEp-2 cells. Infect Immun 58, 1565-1571 Donnenberg MS, Kaper JB, Finlay BB (1977) Interaction between enteropa- thogenic E coli and host epithelial cells. Trends Microbial 5, 109-114 Donnenberg MS, Tacket CO, James SE, Losonsky G”, Nataro JP, Wasserma SS, Kaper JB, Levine MM (1993) Role of the eaeA gene in experimental entro- uathoeenic Escherichia coli infection. i Clinynvest 92, 1412-1417 Donnenberg MS, Yu J, Kaper JB (1993b) A second chromosomal gene necessary for intimate attachment of enteropathogenic Escherichia coli to epithelial cells. J Bncteriol 1 75, 4670- 4680 Finlay BB, Rosenshine I, Donnenberg MS, Kaper JB (1992) Cytoskeleta com- position of attaching and effacing le- sions associated with enteropathoge- nit Escherichia coli adherence to HeLa cells. Infect Immun 60, 2541-2543 Foubister V, Rosenshine I, Finlay BB (1994) A diarrhea1 pathogen, entero- pathogenic Escherichia coli (EPEC), triggers a flux of inositol phosphates in infected epithelial cells. ] Exp Med 1, 79, 993-998 Eoubister V, Rosenshine I, Donnen- bere MS, Finlav BB (1994b3 The eaeB gen; of enterohathogenic Escherichia coli is necessary for signal transduc- tion in epithelial cells. Infect Immun 62, 3038-3040 Frankel G, Lider 0, Hershkoviz R, Mould AE Kachalsky SG, Candy DCA, Cahalon L, Humphries MJ, Dougan G (1996) The cell-binding do- main of intirnin from enteropathoge- nit Escherirhia coli binds to beta’ in- tegrins. J Biol Chem 271, 20359-20364 Giron JA, Ho AS, Schoolnik GK (1991) An inducible bundle-forming pili of enteropathogenic Escherichiu coli. Science 254, 710-713 Gomez-Duarte OG, Kaper JB (1995) A plasmid-encoded regulatory region activates chromosomal eaeA expres- sion in enteropathogenic Escherichia co/i. Infect Immun 63, 1767-1776 Haigh R, Baldwin T, Knutton S, Williams PH (1995) Carbon dioxide regulated secretion of the EaeB pro-

19

20

21

22

23

24

25

26

27

28

29

tein of enterooathogenic Escherichia coli. FEM Micribiol A&t 129, 63-68 Hakansson S, Schesser K, Persson C, Galyov EE, Rosqvist R, Homble F, Wolf-Watz H (1996) The YovB vrotein of Yersinia pseudofuberculosi; ishssenti for the translocation of Yop effector proteins across the target cell plasma membrane and displays a contact-de- pendent membrane disrupting activi- ty EMBO 15, 5812-5823 Jarvis KG, Giron JA, Jerse AE, McDa- niel TK, Donnenberp. MS, Kaver B (1995) Enteropatho@nic Eschirichia co/i contains a specialized secretion system necessary for the export of proteins involved in attaching and ef- facing lesions formation. Proc Nafl Acad Sci USA 92, 7996-8000 Jerse AE, Yu J, Tall BD, Kaper JB (1990) A genetic locus of enteropathogenic Escherichia co/i necessary for the pro- duction of attaching and effacine le- sions on tissue cult&e cells. Prockafl Acad Sci USA 87. 7839-7843 Kenny B, Finlay BB (1995) Protein se- cretion by enteropathogenic Escheri- chia co/i is essential for transducing signals to epithelial cells. Proc Nat! Acad Sci USA 92, 7991-7995 Kenny B, Lai LC, Finlay BB, Donnen- berg MS (1996) EspA, a protein se- creted by enteropathogenic Escheri- chiu coIi, is required to induce signals in epithelial cells. Mel Microbial 20, 313-323 Knutton S, Baldwin T, Williams PH, McNeish AS (1989) .4ctin accumula- tion at sites of bacterial adhesion to tissue culture cells: basis of a net diaa- nostic test for enteropatho enic a& enterohemorrhaeic Escheric 8. uz colz. In- feet Immun 57, 1190-1298 Levine MM, Edelman R (1984) Ente- ropathogenic Escherirhia coli of classic serotvpes associated with infant diar- rhea:‘epidemiology and pathogenesis. Eaidemiol Rev 6, 31-51 Maiarrez-Hernandez HA, Amess B, Se&s L, Baldwin TJ, Knutton S; Williams PH, Aitken A (1991) Purifi- cation of a 20-kDa phospho rotein .F from epithelial cells and identi ication as a myosin light chain -’ phospho- rylatior induced by Enteropathogenic Escherichia coli and phorbol ester. FEMS Letf 29 Manjarrez-Hemandez HA, Baldwin TT. Aitken A, Knutton S, W’illiams I’H (1992) Intestinal epithelial cell protein phosphorylation in enteropathogenic Escherichiu coli diarrhoea. Lancef 339, 521-523 McDaniel TK, Jarvis KG, Donnenberg MS, Kaper JB (1995) A genetic locus of enterocyte effacement conserved among diverse enterobacterial patho- gens. PYOC Nat1 Acad .Sci USA 92,1664- 1668 McDaniel TK, Kaper JB (1977) A clo- ned pathogenicity island from ente- ropathogenic Escherichia coli confers the attaching and effacing phenotype

160 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR / actualites (1997) 8,2

of E coIi K-12. Mel Micro&l 23, 399- 407

30 Moon HW, Whipp SC, Argenzio RA, Levine MM, Giannella RA (1983) At- taching and effacing activities of rab- bit and human enteropathogenic Es- cherichia coli in pig and rabbit intes- tines. Infect Immun 41, 1340-1351

31 Nobes DC, Hall A (1995) Rho, rat, and cdc42 GTPases rezulate the assemt of multimolecular f&al complexes asso- ciated with actin stress fibers, lamel- lipodia, and filopodia. Cell 81, 53-62

32 Paulozzi LJ, Johnson KE, Kamahele LM, Clausen CR, Rilev LW, Helgerson SD ‘(1986) Diarrhea associated with adherent enterouathoaenic Escherichia coli in an infant and”toddler center, Seattle, Washinzton. Pediatrics 77.296- 300 ’ ”

33 Rosenshine I, Donnenberg MS, Kaper JB, Finlay BB (1992) Signal transduc- tion between enteropathogenic Esche- richia coli (EPEC) and euithelial cells: EPEC induces

‘r” sinehhosphoryla-

tion of host ce 1 proteins to initiate cvtoskeletal rearrangement and bac- terial uptake. EMB6 J 11, 3551-3560

34 Rosenshine I, Ruschkowski S, Finlay BB (1966) Expression of attaching/ef- facing activity by enteropathogenic

Escherichia coli depends on growth phase, temperature, and rotein syn- .[ thesis upon contact wit epithehal cells. Infect Immun 64, 966-933

35 Rosenshine I, Ruschkowski S, Stein M, Reinsceid D, Mills DS, Fin- lay BK (1996) A pathogenic bacterium triggers epithelial signals to form a functional bacterial receutor that me- diates pseudopod formation. EMBO J 15, 2613-2624

36 Sanger JM, Chang R, Ashton F, Kaper JB, Sanger JW (1996) Novel for of ac- tin-based motility transports bacteria on the surfaces of infected cells. Ce Motil Cytoskeleton 34, 279-287

37 Segal DE, Falkow S, Thompkins LS (1996) Helicobacter pylori attachment to gastric cells induces cytoskeletal rear- rangement and tyrosine phosphory- latior of host cell proteins. Proc Nat1 Acad Sci USA 93, 1259-1264

38 Senerwa D, Olsvik 0, Mutanda LN, Lindqvist KJ, Gathuma JM, Fos- sum K, Wachsmuth K (19891 Entero- pathogenic Escherichia coli serotype 0lll:HNT isolated from preterm neo- nates in Nairobi, Kenya. J Clin Micro- bioI 27, 1307-1311

39 Sohel I, Puente JL, Ramer SW, Bieber D, Wu CY, Schoomik GK (1997) En-

teropathogenic Escherichia coli: iden- tification of a gene cluster coding for bundle-forming pilus morphogene- sis. J Bacterial 1 78, 2613-2628

40 Sory ME Comelis CR (1994) Translo- cation of a hybrid YopE-adenvlate cy- clase from Yersinia enterocolifica into HeLa cells. Mol Microblol 14, 538-594

41 Stein MA, Mathers DA, Yan H, Baim- bridge KG, Finlay BB 111996) Entero- pathogenic Escherichia coli markedly decreases the resting membrane po- tential of Caco-2 and HeLa human ;i%ttelial cells. Infect Imnun 64, 4820-

42 Stone KD, Zhang HZ, Garison LK, Donnenberg MS (1996:) A cluster of fourteen genes from enteropathoge- nit Escherichia coli is sufficient for the biogenesis of a type IV pilus. Mol Mi- crobiol 20, 325-337

43 Tobe T, Schoolnik GK, Sohel I, Bus- tamante VH, Puente JL (1996) Cloning and characterization of bfpTVW, ge- nes required for the transcriptional ac- tivation of bfpA in enteropathogenic Escherichia co/i. Mol Microbial 21, 963- 967

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