5/7/2018 Examen Correction L1 Optique Microscopie 2004 1 - slidepdf.com

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Université de la Méditerranée  Année Universitaire 2003-2004 

Faculté des Sciences de Luminy

DEUG Sciences de la Vie

Module " Transformations d’énergie : Optique & Microscopie"

Première session

(Janvier 2004)

Durée de l’épreuve : 3 heures

Pas de documents autorisés

Question de cours  – Quel est le principe de la microscopie par fluorescence de type confocal ?

Exercice  –  On désire préparer 10 l d’une solution de fluorophores individuels sur une lamellede 22 par 22 mm. On utilise un objectif x100 d’ouverture numérique N.A. = 1.4, une source

lumineuse de longueur d’onde = 514 nm, et la solution mère est à 2 M. Quelle dilution doit-onemployer pour qu’ils soient séparés d’une distance supérieure à la limite de résolution ? (Rappel :

selon le critère de Raileigh, dmin = 1.22   / 2.N.A.) Dans quel sens le calcul évolue-t-il si l’on tientcompte d’une possible agrégation des fluorophores ?

Corrigé Cours : voir poly.

Exercice : dmin = 1.22*514 / 2*1.4 = 224 nm.

Nombre de fluorophores avant dilution : N = c x V x Na = 2 10-6 x 10-5 x 6 1023 = 1.2 1013 (Na : nombre d’Avogadro) 

Nombre après dilution : Nd = N / D, où D est la dilution recherchée.Si les fluorophores sont répartis de façon homogène sur la lamelle, alors

S = Nd x d2 = N x d2 /D = 222= 484 mm2, avec d : distance moyenne entre fluorophoresd > dmin si et seulement si D > Dmin,Soit Dmin = N x dmin

2 / S = [1.2 1013 x (224 10-9)2] / 484 10-6 ≈ 1240

Pour une dilution supérieure ou égale à 1240, les fluorophores seront en moyenne éloignés d’une

distance supérieure à la limite de résolution ; ils pourront donc être observés au microscope defaçon individuelle.

Si les fluorophores sont en parti agrégés, leur nombre apparent diminue, et la distance moyenne

les séparant augmente. On pourra donc conserver une répartition correspondant à la distancecritique de la limite de résolution avec des dilutions moindres (D < Dmin) : il y aura dans ce cas un

nombre plus important de fluorophores sur la lamelle, mais certains seront regroupés au seind’agrégats. 

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