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IDENTIFICATION DES GÈNES NÉCESSAIRES AUDÉVELOPPEMENT DES TUMEURS PANCRÉATIQUES,NOUVELLES CIBLES THÉRAPEUTIQUES POTENTIELLES

C. Archange, S. Vasseur, M. Barthet, E. Calvo, J. Iovanna,J.C. Dagorn

Objectif : Les cellules tumorales s’évadant d’un cancer primi-tif ne forment pas de métastases dans tous les tissus. Il est pro-bable que cela dépende de la capacité de ces cellules à résisterau stress provoqué par le nouvel environnement que constituel’organe cible. Le but de ce projet est d’identifier, par uneapproche systématique, des gènes participant à ce programmed’adaptation au nouvel environnement et, de ce fait, impliquésdans le développement tumoral.

Méthodes : Cinq lignées cancéreuses pancréatiques humai-nes avec un fond génétique différent (Capan 1, Capan 2,Mia-PaCa, BxPC3 et Panc 1) ont été injectées chez la sourisnude et ont formé des tumeurs. Pour chacun des coupleslignée/tumeur l’expression de 22 000 gènes différents a étéanalysée à l’aide de puces à ADN (système Affymetrix). Lesgènes surexprimés dans les 5 tumeurs, par rapport à leur lignéed’origine, pourraient être impliqués dans le développementtumoral. Un catalogue de gènes potentiellement impliquésdans la progression tumorale pancréatique a été alors établi.Pour tester cette hypothèse, nous allons inhiber l’expressionde certains d’entre eux, à l’aide de siRNA ou d’inhibiteursspécifiques quand ils existent, dans les lignées étudiées et enanalyser in vitro les conséquences sur 3 critères de tumorigéni-cité (prolifération, capacité d’invasion sur Matrigel et forma-tion de clones en agar mou) et in vivo (développement tumoralchez la souris nude).

Résultats : Nous avons identifié 246 gènes activés plus de2 fois dans les cinq tumeurs pancréatiques et validé par RT-PCR quantitative les résultats fournis par les puces. Les gènesidentifiés sont impliqués dans des mécanismes commel’angiogènese, l’implantation tumorale, la signalisation, lecycle cellulaire, l’apoptose et la maturation des ARNm. Nousavons également identifié un certain nombre de protéinessécrétoires, d’enzymes impliquées dans le métabolisme, desprotéines du cytosquelette, des récepteurs et des protéines demembrane, plusieurs sérine/thréonine et tyrosine kinases, fac-teurs de transcription et protéines nucléaires, et enfin plusieursprotéines dont la fonction reste à établir.

Conclusion et perspectives : Ce travail nous a permis d’établirun catalogue exhaustif des gènes nécessaires au développe-ment tumoral pancréatique. L’étude systématique de cesgènes, dans le contexte tumoral, devrait nous permettred’identifier les cibles thérapeutiques les plus adaptées à untraitement efficace des cancers pancréatiques.

IMPLICATION DE TP53INP1 DANS DES MÉCANISMESINDÉPENDANTS DE P53 : RÔLE DANS LACANCÉROGENÈSE

R. Tomasini, J. Nowak, C. Bontemps, A. Carrier, J.C. Dagorn,M.J. Pébusque, J. Iovanna, N. Dusetti

TP53INP1 est un nouveau gène de réponse à p53. Au cours denos précédents travaux, nous avons montré que TP53INP1 nonseulement induit l’arrêt du cycle cellulaire et l’apoptose lorsde différentes situations de stress mais aussi interagit directe-ment avec p53 modifiant son activité.Récemment, l’utilisation de cellules provenant d’une sourisTrp53-/- nous a permis de montrer que la surexpression deTP53INP1 provoque aussi un arrêt du cycle cellulaire et uneinduction de l’apoptose même si ces cellules ne possèdent pasun gène Trp53 fonctionnel. Ces résultats montrent queTP53INP1 est impliqué dans un mécanisme capable d’induirel’arrêt du cycle cellulaire et l’apoptose d’une manière indépen-dante de p53. Nous avons alors cherché à savoir si TP73, ungène de la famille de TP53, est capable de compenserl’absence de TP53.Nos résultats montrent que TP53INP1 est transcriptionnelle-ment induit par la surexpression de la protéine p73. Nousmontrons aussi que TP53INP1 est capable de modifier l’acti-vité de p73 sur ses promoteurs cibles (Mdm2, p21, Bax).Enfin, des expériences de cytométrie de flux et des tests deformation de colonies montrent que l’arrêt de la proliférationcellulaire et l’apoptose induits par p73 sont fortement aug-mentés en présence de TP53INP1.L’ensemble de ces résultats nous permet d’émettre l’hypothèseque TP53INP1 est capable d’induire l’arrêt du cycle cellulaireet l’apoptose par une voie p73-dépendante. L’importance deTP53INP1 dans les mécanismes de progression tumorale, lors-que TP53 est inactivé, retient tout particulièrement notre atten-tion. En effet, plus de 50 % des tumeurs comportent uneinactivation de p53, et l’induction de l’arrêt du cycle cellulaireet de l’apoptose, dans ces cellules, reste d’une importancecapitale. Dernièrement, une étude de l’équipe de Rodicker(Cancer Research, 2003), montre que la surexpression de p73permet de réactiver l’apoptose dans des cellules pancréatiquesrésistantes à l’apoptose induite par p53. L’implication deTP53INP1 dans les mécanismes de cancérogenèse, au niveaudu pancréas, se trouve donc particulièrement pertinent.

INSERM U.624, Stress Cellulaire, Marseille. INSERM U624, Stress Cellulaire, Marseille.