Milieu Clostridium Renforcé

DM618. Milieu semi-solide pour la culture et lanumération des clostridies et autres bactéries anaérobiesdans les aliments et les échantillons cliniques.

Contenu: Voir l’étiquette de la boite.

Formule* Concentrationdans le milieu

Mélange de peptones 20,0 g/litreExtrait de levures 3,0 g/litreGlucose 5,0 g/litreChlorure de sodium 5,0 g/litreAmidon soluble 1,0 g/litreAcétate de sodium 3,0 g/litreCystéine hydrochloride 0,5 g/litreAgar 0,5 g/litre

pH final : 6,8 ± 0,2

ConservationToutes les boîtes doivent impérativement être bienfermées et stockées jusqu’à la date de péremptionindiquée sur l’étiquette dans un endroit sec à unetempérature ne dépassant pas 25°C.Certains milieux se conservent à 2-8°C, se référer àl’étiquette de l’emballage.

PrécautionsUsage In Vitro uniquement. Observer les règles desécurité et d’hygiène en vigueur. Ne peut être utilisé quepar du personnel de laboratoire qualifié. Stériliser leseffluents biologiques dangereux avant de les éliminer. Seréférer à la fiche de sécurité du produit (disponible surdemande ou via le site internet MAST).

Matériels nécessaires non fournisRéactifs et équipements microbiologiques standards(anses, suppléments sélectifs MAST, écouvillons,ensemenceurs, autoclaves et incubateurs, etc…) ainsique des réactifs sérologiques et biochimiques et desadditifs tels que le sang.

Préparation1. Se référer à l’étiquette de la boîte pour les volumes

et quantités nécessaires. Préparer le milieuClostridium renforcé MAST (DM618) en dissolvant lapoudre dans de l’eau distillée ou désionisée. Pour lessachets de milieu, dissoudre tout le contenu dusachet dans le volume d'eau inscrit sur l'étiquette.

2. Chauffer doucement jusqu’à ébullition. Mélangercomplètement, puis distribuer 25ml dans lesrécipients adaptés (ex: bouteille à bouchon vissé de30ml).

3. Autoclaver à 121°C pendant 15 minutes.4. Le milieu préparé peut être utilisé immédiatement ou

stocké à 2-8°C pendant une semaine au plus avantl’utilisation. Si le milieu n’est pas utilisé au bout de 4heures, les flacons doivent être chauffés à 100°Cpendant 10 minutes avant utilisation.

5. Alternativement, un milieu solide peut être préparépar l’ajout de 14,5g d’agar (MAST RM10) par litreavant autoclavage.

6. Préparer des dilutions sérielles au 1:10 d’aliments ouautres échantillons avec un diluant adapté ex: EauPeptonée Tamponnée MAST (DM494). Ensemencer1ml des dilutions dans les tubes de milieu ClostridiumRenforcé MAST (DM618).

7. Incuber en aérobie pendant 24-48 heures à 35-37°C.8. Des méthodes différentes d’inoculation et

d’incubation peuvent être utilisées en fonction de laméthode choisie.

Interprétation des résultatsAprès incubation, compter toutes les colonies et calculerle nombre de colonies formant unités (CFU) par mld’échantillon en tenant compte des facteurs de dilution.Effectuer des tests biochimiques supplémentaires sur lescolonies provenant de culture pure pour confirmerl’identification.

Contrôle de qualitéVérifier tous signes de détérioration. Le contrôle dequalité doit être effectué avec au moins une souche pourdémontrer un résultat conforme. Ne pas utiliser le produitsi le résultat d’une souche de contrôle est incorrect. Laliste ci-dessous montre la performance de souches decontrôle que l'utilisateur peut se procurer facilement.

Souche test RésultatClostridium perfringensATCC 13124

Croissance

Bacteroides fragilisATCC 25285

Croissance

LimitesIl est recommandé que les tests biochimiquessupplémentaires soient effectués sur les colonies d’uneculture pure pour confirmer l’identification deCl.perfringens. La batterie minimale de tests comporte: lafermentation du lactose, la liquéfaction de la gélatine, lamobilité et la réduction des nitrates en nitrites.

RéférencesBibliographie disponible sur demande.

IFU405 NB 06/08 V2MAST est une marque déposée.

ATCC est une marque déposée de AmericanType Culture Collection, Manassas, Virginia, USA.

*La formule peut varier pour optimiser les performances