COMMUNICATIONS ORALES O1 Modèles animauxGénétique - Neurobiologie

01-1 Implication du ganglioside GM1 dansl’externalisation du peptide Aβ‚ au coursde la maladie d’Alzheimer et dans sesmodèles transgéniques

N. Girardot1, 2, D. Langui1, 2, G. Raposo3, L. Buée4, C. Duyckaerts 1, 2

1 Inserm U679, Paris, France ; 2 Laboratoire de neuropathologie Raymond Escourolle, Hôpital deLa Salpêtrière, France ; 3 CNRS-UMR144, Institut Curie, Section de Recherche, Paris,France ; (4) Inserm U422, Lille, France.

Objectif : L’une des lésions caractéristiques de la maladied’Alzheimer (MA) est le dépôt extracellulaire de peptide Aβdans le parenchyme cérébral. Le mécanisme par lequel l’Aβintracellulaire (en partie hydrophobe) quitte la membrane cel-lulaire pour s’accumuler dans l’espace extracellulaire, resteincompris. Des granules intracytoplasmiques d’Aβ sont obser-vés chez les jeunes souris transgéniques APP x PS1 (Langui etal., 2004). Par ailleurs, des études biochimiques on montré unlien étroit entre le ganglioside GM1, un glycolipide associéaux microdomaines rafts, et le peptide Aβ (Yanagisawa et al.,1995).Matériel et méthodes : La sous unité B de la toxine cholé-rique (BCTx), rendue fluorescente, a été utilisée comme sondepour détecter le GM1 sur des échantillons de cortex cérébralhumain et de souris transgéniques APP x PS1 ainsi que sur unelignée cellulaire SH-SY5Y transfectée de façon stable par legène muté de l’APP. Les préparations ont été observées enmicroscopie confocale. Le dosage du peptide Aβ dans le sur-nageant de culture a été effectué par ELISA (Innogenetics). Résultats : Chez l’homme et la souris transgénique, la BCTxmarquait les neurites dystrophiques à la périphérie des plaquesséniles et des structures membranaires, où une colocalisationavec le peptide Aβ était observée. Le cœur amyloïde étaitnégatif. Le surnageant des cultures a été ultracentrifugé; leculot contenait des vésicules, marquées par l’anticorps anti-Aβet dont le diamètre était plus petit (de l’ordre du nanomètre)que celui des exosomes décrits dans d’autres systèmes cellu-laires. Le GM1 n’a pas été trouvé dans le surnageants. Afin dedéterminer le rôle du GM1 dans l’externalisation du peptideAβ, la synthèse du ganglioside a été inhibée par le PDMP

appliqué dans le milieu de culture. Les dosages ELISA ontmontré une diminution significative de la concentrationd’Aβ42 dans le surnageant. Le peptide A‚ apparaissait séques-tré dans le cytoplasme des cellules.

Conclusion : Ces résultats suggèrent que 1) l’interaction Aβ -GM1 est limitée à la membrane cellulaire et que 2) le ganglio-side GM1 joue un rôle dans la sécrétion du peptide Aβ, exter-nalisé dans une particule de quelques nanomètres de diamètre.

RÉFÉRENCESLANGUI D, GIRARDOT N, EL HACHIMI KH, ALLINQUANT B, BLANCHARD V,

PRADIER L, DUYCKAERTS C. (2004). Subcellular topography of neu-ronal Abeta peptide in APPxPS1 transgenic mice. Am J Pathol,165:1465-1477.

YANAGISAWA K, ODAKA A, SUZUKI N, IHARA Y. (1995). GM1 gangliosi-de-bound amyloid beta-protein (A beta): a possible form of prea-myloid in Alzheimer's disease. Nat Med, 1: 1062-1066.

01-2 La pathologie amyloïde : un facteur derisque pour la démence à corps de Lewysporadique

V. Deramecourt5 , S. Bombois5, N. Sergeant1, C.A. Maurage3,A. Ghestem1, E. Vanmechelen2, H. Drobecq4, F. Lebert5,F. Pasquier5, A. Delacourte1

1 INSERM U422, Lille, France ; 2 Innogenetics, Gand, Belgique ; 3 Laboratoire de Neuropathologie, CHRU, Lille, France ; 4 UMR 8525 CNRS, Lille, France. ; 5 Centre de la Mémoire, EA2691 MENESR et ADERMA, CHRU,Lille, France.

La démence à corps de Lewy (DCL) est une entité anatomo-clinique définie sur le plan moléculaire par la présenced’agrégats intra neuronaux majoritairement constituésd‘α-synucléine : les corps et les neurites de Lewy, observésau niveau du cortex limbique et de certaines aires néocorti-cales. Néanmoins, dans la majorité des cas de DCL, les corpsde Lewy s’associent aux lésions caractéristiques de la maladied’Alzheimer (MA) : les dégénérescences neurofibrillaires etles plaques amyloïdes.

4S58 Rev Neurol (Paris) 2005 ; 161 : 12 pt 2, 4S58-4S61

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Objectif : Déterminer si ce chevauchement lésionnel entreDCL et MA est uniquement d'origine statistique ou s'il estpossible de mettre en évidence une synergie entre ceslésions.

Matériel et méthodes : 20 cas autopsiques issus de notreétude prospective et pluridisciplinaire ont été analysés. Ils’agissait de 9 cas répondant aux critères cliniques de DCLpossible ou probable, ou ayant des corps de Lewy corti-caux. Ces cas ont été comparés à des cas de MA, de mala-die de Parkinson et à des témoins sains. Tous les cerveauxont été étudiés d’un point de vue neuropathologique etbiochimique. Un score biochimique a été dressé pourl’α-synucléopathie, la tauopathie et la pathologie amyloïde.

Résultats : Les 8 cas de DCL sporadique avaient desdépôts d’Aβ x-42 abondants, équivalents en quantité et enqualité aux dépôts d’Aβ x-42 observés dans la MA.L’unique cas de DCL pure avait une histoire familiale dedémence avec syndrome parkinsonien. CONCLUSION :La présence constante et abondante de dépôts d’Aβ x-42dans la DCL sporadique suggère qu’un défaut dans le méta-bolisme de l’APP (Amyloid precursor protein), conduisantaux dépôts amyloïdes, est un facteur de risque de progres-sion de l’α-synucléopathie corticale. Cet effet promoteur aen effet déjà été mis en évidence sur la tauopathie de laMA. Cette hypothèse, si elle était vérifiée à l’avenir, amè-nerait à considérer le métabolisme de l’APP comme unecible thérapeutique commune à la DCL et à la MA.

01-3 Mécanismes de la mort neuronale induitepar un fragment du domaine cytoplasmiquedu Précurseur du Peptide Amyloïde

A. Madeira1, J.M. Pommet2, A. Prochiantz2, S. Pimplikar3,B. Allinquant1

1 INSERM U573, centre Paul Broca, 75014 Paris, France ; 2 CNRS UMR 8542, ENS, 75005 Paris, France ; 3 Case Western Reserve University, Cleveland OH 44106-4943, USA.

Objectif : Le précurseur du peptide amyloïde (APP) estune protéine transmembranaire de type I qui présente entreautres, un site caspase dans son domaine cytoplasmique.

Des études récentes ont mis en évidence une activité cas-pase et la présence de fragments d’APP clivés au site cas-pase dans le cortex enthorinal et l’hippocampe de patientsatteints de la maladie d’Alzheimer. Ce clivage permet ainsile démasquage du fragment cytoplasmique juxtamembra-naire de l’APP (Jcasp) dont l’accumulation dans des cul-tures primaires de neurones est à l’origine de phénomènesapoptotiques in vitro et in vivo. Ce clivage au site caspasen’empêche pas le clivage en peptide Aβ, nous avons alorsmontré que le domaine s’étendant du site gamma secrétasejusqu’au site caspase induit également de l’apoptose. Nousavons récemment identifié deux partenaires interagissant

précocement avec ces domaines cytoplasmiques de l’APP.Ces partenaires sont PAT1, déjà connu pour interagir avecle domaine juxtamembranaire de l’APP, et SET/I2PP2A,qui peut agir soit comme un facteur de transcription, soitcomme un modulateur de la phosphorylation de tau. Le butde ces travaux est de déterminer l’implication de ces parte-naires protéiques et d’aborder les mécanismes conduisant àcette mort neuronale.Matériel et méthode : L‘expression de SET/I2PP2A et dePAT1 dans les cultures primaires de neurones a été vérifiéepar immunocytochimie et par technique de western blot.Nous avons également utilisé la stratégie anti-sens pourdiminuer l’expression des protéines dans les neurones invitro. L’augmentation de l’expression de SET/I2PP2A dansles neurones a été réalisée par internalisation de la protéinerecombinante et par transfection.Résultats : SET/I2PP2A est directement impliqué dans lamort neuronale présente dans ce modèle. La présence desfragments d’APP dans le cytoplasme induit une redistribu-tion partielle de SET/I2PP2A du noyau vers le cytoplasme.De plus, surexprimé dans le cytoplasme ou le noyau,SET/I2PP2A est capable d’induire l’apoptose.Conclusion : Ces résultats suggèrent que SET/I2PP2Aest directement impliqué dans la modulation de la mortneuronale. La relation entre SET/I2PP2A et PAT1 ainsique leur implication dans l’augmentation de l’expressionde l’APP à la surface des cellules dans le modèle serontdiscutés.

01-4 Identification of a Novel Panel of CSFBiomarkers for the Early Diagnosis ofAlzheimer’s Disease

A.H. Simonsen1, J. McGuire1, V.N. Podust1, N. Andreasen2,A. Wallin3, F. Zhang1, G. Waldemar4, T. Pirttilä5, K. Blennow3,H.A. Davies1

1 Diagnostic Division of Ciphergen Biosystems, Fremont,California, USA ; 2 Karolinska University Hospital, Huddinge, Sweden ; 3 Sahlgrenska University Hospital, Mölndal, Sweden ; 4 Copenhagen University Hospital, Copenhagen, Denmark ; 5 University of Kuopio, Kuopio, Finland.

Early diagnosis of Alzheimer’s disease is required to ini-tiate symptomatic treatment with currently approveddrugs, and will be of even greater importance if diseasemodifying compounds in development display a clinicaleffect. Protein biomarkers could play an important rolein the detection and diagnosis of Alzheimer’s diseaseearly in the course of the illness where clinical symp-toms are often vague and non-specific.Objective: Our aim was to discover, pre-validate andsequence new protein biomarkers of very early stageAlzheimer's disease.

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