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64 REVUE NEUROLOGIQUE 165 (2009) 53 - 64 ensuite reçu 3 injections sous-cutanées de K6Aβ1-30 suivies de prélèvements sanguins à différents temps post-injection afin de suivre la réponse immunitaire. Le comportement des animaux a été testé en parallèle. A la fin du protocole, des ana- lyses neurohistologiques ont été effectuées pour rechercher les lésions de type Alzheimer : plaques amyloïdes, protéine Tau agrégée, gliose... Résultats : Les microcèbes âgés présentent une bonne réponse immunitaire. De plus, 5 mois après la dernière injection, la réponse immunitaire était réversible en l’absence d’immu- nisation. L’analyse comportementale montre un maintien des compétences mnésiques chez les animaux immunisés. L’analyse neuropathologique montre une diminution des lésions corticales. Des plaques amyloïdes compactes ont été détectées chez un animal témoin alors que chez un animal immunisé les plaques étaient diffuses. Nous avons égale- ment observé une diminution de l’Aβ intracellulaire chez les microcèbes immunisés accompagnée d’une augmentation du nombre de neurones pyramidaux marqués par la protéine tau normale. D’autre part, aucune microhémorragie n’a été détectée chez les animaux et la présence de microglie est plus faible chez les immunisés. Conclusion : la vaccination par le peptide K6Aß1-30, bien tolérée par les microcèbes âgés, va dans le sens d’une amé- lioration des performances cognitives et d’une diminution de la présence de marqueurs pathologiques. P1-23 “Studying the roles of the OST subunits in Alzheimer’s disease” C. Wilson Université de Limoges, Faculté de Médecine, Groupe de Neurobiologie Cellulaire, 2, rue du Dr Marcland, EA 3842 Homéostasie Cellulaire et Pathologies-Service d’Histologie et de Biologie Cellulaire., 87025 LIMOGES, France In eukaryotic cells, N-glycosylation is typically the most common protein modification that occurs in the ER lumen. N-glycosylation is facilitated by a large heterologous complex called the oligosaccharyltransferase (OST) which allows the attachment of a high mannose oligosaccharide from a dolichol pyrophosphate donor en bloc onto a free asparagine residue of a newly synthesised nascent chain during the translocation in the ER lumen. Defects in the process of N-glycosylation are often associated with a variety of diseases such as congenital disorders of glycosylation and Non-syndromic mental retarda- tion. The focus of this work was based on our previous findings that some of the subunits of the OST may have alternative functions and play a role in the processing pathway of amyloid precursor protein (APP). We use a combination of methodolo- gies developed during the project including RNA interference, Western blotting, and a fluorescent tripeptide assay to tackle these questions. Recent investigations reveal that depletion of some of the OST subunits, can affect APP processing leading to a reduction in both C-terminal fragments and full length N-glycosylated APP. The site of cleavage is of clinical relevance since Aβ peptides (Aβ 40-42) derived from γ-secretase cleavage of APP are major components of the amyloid plaques that are a characteristic brain lesion of individuals with Alzheimer’s disease. Globally, depletion of some of the OST subunits has no effect upon N-glycosylation. The primary goal of this project is to establish if depleting these subunits would have any implication for Alzheimer’s disease. We show for the first time that overexpression of some of the OST subunits causes an increase in the active γ-secretase complex particularly the N-terminal fragment of PS1 that is generated by endoproteo- lysis. The results from this study will enable us to understand better how the mammalian OST machinery attaches N-linked glycans to proteins and to understand the alternative roles of the OST subunits in Neurological diseases such as Alzheimer’s disease and NSMR.

P1-23 “Studying the roles of the OST subunits in Alzheimer's disease”

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Page 1: P1-23 “Studying the roles of the OST subunits in Alzheimer's disease”

64 Revue NeuRologique 165 (2009) 53 - 64

ensuite reçu 3 injections sous-cutanées de K6Aβ1-30 suivies

de prélèvements sanguins à différents temps post-injection

afin de suivre la réponse immunitaire. Le comportement des

animaux a été testé en parallèle. A la fin du protocole, des ana-

lyses neurohistologiques ont été effectuées pour rechercher

les lésions de type Alzheimer : plaques amyloïdes, protéine

Tau agrégée, gliose...

résultats : Les microcèbes âgés présentent une bonne réponse

immunitaire. De plus, 5 mois après la dernière injection, la

réponse immunitaire était réversible en l’absence d’immu-

nisation. L’analyse comportementale montre un maintien

des compétences mnésiques chez les animaux immunisés.

L’analyse neuropathologique montre une diminution des

lésions corticales. Des plaques amyloïdes compactes ont été

détectées chez un animal témoin alors que chez un animal

immunisé les plaques étaient diffuses. Nous avons égale-

ment observé une diminution de l’Aβ intracellulaire chez les

microcèbes immunisés accompagnée d’une augmentation

du nombre de neurones pyramidaux marqués par la protéine

tau normale. D’autre part, aucune microhémorragie n’a été

détectée chez les animaux et la présence de microglie est plus

faible chez les immunisés.

Conclusion : la vaccination par le peptide K6Aß1-30, bien

tolérée par les microcèbes âgés, va dans le sens d’une amé-

lioration des performances cognitives et d’une diminution de

la présence de marqueurs pathologiques.

P1-23 “Studying the roles of the OST subunits in alzheimer’s disease”

C. Wilson

Université de Limoges, Faculté de Médecine, Groupe de Neurobiologie

Cellulaire, 2, rue du Dr Marcland, EA 3842 Homéostasie Cellulaire

et Pathologies-Service d’Histologie et de Biologie Cellulaire., 87025

LIMOGES, France

In eukaryotic cells, N-glycosylation is typically the most

common protein modification that occurs in the ER lumen.

N-glycosylation is facilitated by a large heterologous complex

called the oligosaccharyltransferase (OST) which allows the

attachment of a high mannose oligosaccharide from a dolichol

pyrophosphate donor en bloc onto a free asparagine residue

of a newly synthesised nascent chain during the translocation

in the ER lumen. Defects in the process of N-glycosylation are

often associated with a variety of diseases such as congenital

disorders of glycosylation and Non-syndromic mental retarda-

tion. The focus of this work was based on our previous findings

that some of the subunits of the OST may have alternative

functions and play a role in the processing pathway of amyloid

precursor protein (APP). We use a combination of methodolo-

gies developed during the project including RNA interference,

Western blotting, and a fluorescent tripeptide assay to tackle

these questions. Recent investigations reveal that depletion of

some of the OST subunits, can affect APP processing leading

to a reduction in both C-terminal fragments and full length

N-glycosylated APP. The site of cleavage is of clinical relevance

since Aβ peptides (Aβ 40-42) derived from γ-secretase cleavage

of APP are major components of the amyloid plaques that are

a characteristic brain lesion of individuals with Alzheimer’s

disease. Globally, depletion of some of the OST subunits has no

effect upon N-glycosylation. The primary goal of this project

is to establish if depleting these subunits would have any

implication for Alzheimer’s disease. We show for the first time

that overexpression of some of the OST subunits causes an

increase in the active γ-secretase complex particularly the

N-terminal fragment of PS1 that is generated by endoproteo-

lysis. The results from this study will enable us to understand

better how the mammalian OST machinery attaches N-linked

glycans to proteins and to understand the alternative roles of

the OST subunits in Neurological diseases such as Alzheimer’s

disease and NSMR.