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Mots clés : Naevus congénital ; Mutation BRAF ; Mutation NRASLe naevus congénital (NC) est une tumeur mélanocytaire qui sedéveloppe in utero et qui peut être à risque de transformationmaligne. Des mutations NRAS et BRAF ont été fréquemment rap-portées au sein d’échantillons de NC, mais avec des résultatscontradictoires. Nous avons donc étudié une série de 19 NC degrande taille ou géants et les avons comparés à une série de 20 NCde taille petite ou moyenne à l’aide de différentes techniques deséquencage : Sanger, pyroséquencage, High Resolution Melting, Ice-Cold-PCR. Les NC de de grande taille ou géants présentaient unemutation NRAS dans 94,7 % des cas (18/19). En outre, nous avonsrecherché la présence de mutations additionnelles potentiellementimpliquées dans la genèse des NC : l’analyse en exome sequen-cing de 5 specimens de NC de grande taille ou géants a montréque la mutation NRAS était l’unique mutation somatique récur-rente au sein de ces tumeurs. Le profil génétique des NC de taillepetite ou moyenne était sensiblement différent avec 70 % de muta-tions NRAS et 30 % de mutations BRAF. Ces résultats suggèrent queles mutations NRAS sont suffisantes pour la génération de tumeursmélanocytaires bénignes in utero.

http://dx.doi.org/10.1016/j.annder.2013.09.599

C32Inhibition de CDK4 dans des lignéesde mélanome avec amplificationde Cycline D1 ou de CDK4A. Finet-Benyair ∗, M. Bagot , A. Bensussan , N. DumazInserm, U976, université Paris-Diderot, département dedermatologie, hôpital Saint-Louis, 75010 Paris, France∗ Auteur correspondant.

Mots clés : Mélanome ; CDK4 ; Thérapie cibléeLa Cycline D1 (CyD1) est une petite protéine qui se lie à la CyclinDependant Kinase 4 (CDK4) pour lui permettre de phosphorylerla protéine retinoblastoma (Rb), autorisant ainsi la cellule à pas-ser en phase S du cycle cellulaire. Une amplification des gènesCCND1 (CyD1) et CDK4 est retrouvée dans respectivement 11 % et 9 %des mélanomes (tous sous-types confondus), et plus fréquemmentdans les mélanomes acro-lentigineux (atteignant les extrémitéset les muqueuses). Pour déterminer si l’inhibition du complexeCyD1/CDK4 a un intérêt thérapeutique dans les mélanomes pré-sentant une amplification de CyD1 ou CDK4, nous avons testé uninhibiteur sélectif de CDK4/6, PD0332991, sur trois lignées de méla-nome. Deux lignées présentent une amplification de CCND1 (sansmutation de BRAF, NRAS ou KIT), et la troisième porte une ampli-fication de CDK4 et une mutation de NRAS. PD0332991 inhibe laphosphorylation de certains sites de Rb dès trois jours de traite-ment. Dans les 3 lignées de mélanome, il bloque le cycle cellulaire,et diminue la formation de clones. Dans les cellules avec amplifica-tion de CyD1, l’inhibiteur de CDK4 induit leur sénescence à partirde sept jours mais n’entraîne pas d’apoptose. Dans la lignée avecamplification de CDK4, PD0332991 induit une sénescence plus pré-coce et des phénomènes d’apoptose. Ces données suggèrent quel’inhibition sélective de CDK4/6 puisse avoir un intérêt thérapeu-tique pour les mélanomes présentant une amplification de CyD1 ouCDK4.

http://dx.doi.org/10.1016/j.annder.2013.09.600

C33CDH1 : un rôle dans la prédispositionau mélanome ?M. Benfodda a,∗, H.-H. Hu a, A. Riffault a, V. Descamps b,c,M. Bagot b,d, A. Bensussan b,d, B. Grandchamp a, N. Soufir a,b

a Département de génétique, hôpital Bichat, AP—HP, Paris, Franceb Inserm U976, hôpital Saint-Louis, Paris, Francec Dermatologie, hôpital Bichat, AP—HP, Paris, France

d Dermatologie, hôpital Saint-Louis, Paris, France∗ Auteur correspondant.

Mots clés : Cancer de l’estomac ; CDH1 ; MélanomeLe gène CDH1 code pour l’E-cadhérine qui joue un rôle fondamen-tal dans la jonction, la polarisation et la différentiation cellulaire.Les mutations germinales de CDH1 prédisposent au cancer del’estomac. Une perte de l’expression de CDH1 est associée à laprogression dans le mélanome(MM). Le but de notre travail étaitd’explorer le rôle de ce gène candidat dans la prédisposition au MM.Nous avons séquencé les 16 exons de CDH1 chez 96 patients atteintsde MM (25 MMs familiaux, 23 multiples, 19 MM + autre K (dont 8/aveccancer du sein). Les variants faux-sens ont été analysés par les sitesPolyphen et SIFT pour déterminer leur effet sur la protéine. Nousavons également réalisé un marquage immuno-histochimique sur lestumeurs des malades mutés CDH1. Nous avons identifié 2 mutationsfaux-sens non connues, Arg224Cys chez une patiente qui a déve-loppé un MM et un cancer du sein, et Ile535Phe chez un patientqui a développé un MM multiple. L’analyse in silico sur les sitesPolyphen et SIFT montre un effet délétère de ces deux mutations.Une autre mutation faux-sens Ala617Thr décrite dans la prédisposi-tion au cancer de l’estomac, a été retrouvée chez un seul patient.L’étude par immuno-histochimie n’a pas montré une diminutionou une perte d’expression de l’E-cadhérine au niveau des tissustumoraux. Les mélanocytes normaux font une partie intégrante del’épithélium cutané et sont liés aux kératinocytes via les Ecadhé-rines. Plusieurs travaux montrent une perte d’expression précoce deCDH1 lors de la progression tumorale au profit de l’expression de laN-cadhérine. Une mutation constitutionnelle de CDH1 pourrait favo-riser ce processus. Nos résultats suggèrent une implication du CDH1dans la prédisposition au mélanome. Le séquencage d’un nombreplus important de malade permettrait confirmer ces données.

http://dx.doi.org/10.1016/j.annder.2013.09.601

Session 7 : Recherche clinique et translationnelle

C34Potentiel anti-tumoral des cellulesNatural Killer circulantes et infiltrantles métastases ganglionnaires despatients atteints de mélanome àdifférents stades évolutifsM. Messaoudene a,∗, E. Fourmentraux-Neves a, G. Fregni a,J. Chanal b, M.-F. Avril a,b, A. Caignard a

a Institut Cochin, Inserm U1016, CNRS UMR 8104, universitéParis-Descartes, 75014 Paris, Franceb AP—HP, université Paris-Descartes, département dedermatologie, hôpital Cochin, 75014 Paris, France∗ Auteur correspondant.

Mots clés : Mélanome ; Immunothérapie ; Cellules Natural KillerLes mélanomes sont des tumeurs agressives avec un fort potentielmétastatique. Les données cliniques indiquent que les thérapiesciblées induisent des taux élevés de réponses mais celles-cisont de durée limitée dans le temps. Nous évaluons l’intérêt denouvelles approches thérapeutiques combinant immunothérapieet thérapies ciblées et les mécanismes d’action sous-jacents.Nous étudions tout particulièrement les cellules Natural killer (NK)qui sont des effecteurs cytotoxiques antitumoraux, à différentsstades de la maladie. Nous avons montré que les cellules NKinfiltrent les tumeurs primaires (mélanomes épais) et les ganglionsrégionaux métastatiques : cette étude a été réalisée par immuno-histochimie en utilisant un marqueur spécifique (anti-NKp46). Deplus, nous avons caractérisé les NK du sang et les NK infiltrant les

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métastases ganglionnaires. Les NK sanguines présentent au coursde l’évolution tumorale une diminution du récepteur activateurNKp46. L’expression de ce récepteur corrèle avec la durée du stadeIV. À partir d’une série de 25 métastases, nous avons identifiéune nouvelle population de cellules NK infiltrant les métastasesganglionnaires. Cette sous-population NK se caractérise par unphénotype activé et des marqueurs indiquant leur origine sanguine.Fonctionnellement les NK circulantes et infiltrant les métastasesganglionnaires sont peu cytotoxiques ex vivo, mais une activationpar les cytokines induit rapidement leurs capacités fonctionnelles(cytotoxicité et production d’IFNg), notamment pour les NK infil-trant les métastases ganglionnaires. Les NK ganglionnaires sont pluscytotoxiques que les NK du sang. Ces données sont des argumentsexpérimentaux solides pour proposer l’évaluation en clinique deces effecteurs en combinaison avec des inhibiteurs de kinases.

http://dx.doi.org/10.1016/j.annder.2013.09.602

C35Les lymphomes B diffus à grandescellules de type jambe(LBDGC-TJ) sont porteurs de multiplesanomalies génétiques en faveur d’unelymphomagenèse commune avec leslymphomes B diffus à grandes cellulesde type ABC « Activated B-Cell »(LBDGC-ABC)A. Pham-Ledard a,b,∗, M. Prochazkova-Carlotti a, L. Andrique a,D. Cappellen a,c, B. Vergier d, F. Martinez c, F. Grange d,T. Petrella e, M. Beylot-Barry a,b, J.-P. Merlio a,e

a EA2406 histologie et pathologie moléculaire des tumeurs,université Bordeaux, Bordeaux, Franceb Service de dermatologie, CHU de Bordeaux, Pessac, Francec Service de pathologie, CHU de Bordeaux, Pessac, Franced Service de dermatologie, CHU de Reims, Reims, Francee Centre de pathologie, Dijon, France, France∗ Auteur correspondant.

Mots clés : Lymphome ; Génétique ; MYD88Le LBDGC-TJ est une entité partageant des caractéristiques biolo-giques avec les LBDGC-ABC. Cette étude rétrospective recherchaitdes anomalies communes au plan génétique sur des biopsiescutanées de 23 patients. Nous avons observé en FISH un réar-rangement de BCL2/BCL6/MYC dans 1/23, 6/23, et 3/23 cas,respectivement (anomalies mutuellement exclusives). Il existaitune délétion de p16 dans 5/23 (26 %) cas, et de BLIMP1 dans11/18 cas. Chez les patients porteurs d’anomalies multiples, unetechnique d’hybridation—dénaturation successive des sondes sur lamême lame puis de relocalisation au microscope à fluorescencepermettait de montrer que plusieurs anomalies étaient portéespar les mêmes noyaux. La mutation activatrice de MYD88 (L265P)était mise en évidence par séquencage dans 61 % des cas. LeLBDGC-TJ semble être porteur d’anomalies génétiques communesavec les LBDGC-ABC : réarrangements chromosomiques similaires(notamment BCL6 et MYC) et mutation de MYD88 fréquente. Celaencourage à explorer d’autres voies communes, afin de pouvoirensuite les exploiter au plan thérapeutique.

http://dx.doi.org/10.1016/j.annder.2013.09.603

C36Délétion large de 15,9 kb du gèneABHD5 par recombinaison nonhomologue entre des séquencesLINE-1 et Alu responsable d’unsyndrome de Dorfman—Chanarin

B. Roussel a,∗, C. Prost-Squarcioni b,c, F. Nery d, L. Laroche c,P.O. Schischmanoff e, F. Caux a,c

a Li2P EA4222, université Paris 13, Paris, Franceb Histologie, université Paris 13, Paris, Francec Dermatologie, hôpital Avicenne, AP—HP Bobigny, Paris, Franced Hepatologie, hôpital Beaujon, Clichy, Francee Biochimie, hôpital Avicenne, AP—HP Bobigny, Paris, France∗ Auteur correspondant.

Mots clés : ABHD5 ; Délétion ; Recombinaison génétiqueLe gène ABHD5, comportant 7 exons, est muté dans unemaladie de surcharge lipidique avec ichtyose, le syndrome deDorfman—Chanarin (SDC). Nous avons étudié au plan moléculaire unnouveau patient d’origine marocaine issu d’une famille consanguineavec SDC typique et surcharge lipidique cytoplasmique observée enmicroscopie électronique.L’ARNm du gène ABHD5 du patient était absent en RT—qPCR. Leséquencage selon Sanger des régions codantes du gène ABHD5 amontré l’absence des exons 1 et 2. Les extrémités d’une éventuelledélétion ont été analysées à l’aide de couples d’amorces distri-bués de facon régulière entre l’intron 2 et—40391 pb avant l’ATG.Une délétion de 15935 pb située entre—6112 et +9829 pb (intron2) était retrouvée. Entre les bornes de cette délétion, était insé-rée une séquence supplémentaire de 46 pb. L’étude des séquencesconstituant les points de cassures retrouvait une homologie avecune séquence LINE-1 pour la borne en 5′ et avec une séquencede la famille Alu-Sb1 pour la borne en 3′. La séquence de 46 pbétait homologue à 98 % avec une séquence consensus Alu-Sb1. Cesrésultats évoquent un mécanisme de recombinaison non homologuefaisant intervenir ces séquences connues pour être impliquées dansla genèse de maladies héréditaires dues à de grands réarrange-ments génomiques. Nous rapportons la plus large délétion du gèneABHD5 décrite à ce jour dont l’origine pourrait faire intervenir desséquences répétées rétrotransposables.

http://dx.doi.org/10.1016/j.annder.2013.09.604

C37Maladie de Parkinson et mélanome :une piste génétique commune liéeà l’inactivation de PARK2H.H. Hu a,b,∗, N. Dumaz a,b, S. Lesage c, L. Michel a,b,V. Descamps a,b,d, S. Mourah e, N. Basset-Seguin a,b,f,L. Deschamps b,g, M.T. Leccia h, A. Tsalamlal i, S. Klebe j,A. Couvelard b,g, T. Luc k, A. Brice c,l, N. Soufir a,b,i

a Inserm U976, hôpital Saint-Louis, Paris, Franceb Université Paris-7, hôpital Saint-Louis, Paris, Francec Inserm U975, hôpital Bichat, Paris, Franced Dermatologie, hôpital Bichat, Paris, Francee Inserm U940, hôpital Saint-Louis, Grenoble, Francef Dermatologie, hôpital Saint-Louis, Grenoble, Franceg Département pathologie, hôpital Beaujon, Grenoble, Franceh Dermatologie, CHU de Grenoble, Grenoble, Francei Département Génétique, hôpital Bichat, Paris, Francej Département Neurology, université Hospital Würzburg, Germanyk Dermatologie, hôpital Hôtel-Dieu, Paris, Francel Génétique, hôpital Pitié-Salpêtrière, Paris, France∗ Auteur correspondant.

Mots clés : Mélanome ; Maladie de Parkinson ; Mutation de PARK2Les études épidémiologiques ont montré une incidence plus éle-vée de mélanome (MM) chez les patients atteints de la maladie deParkinson (MP). PARK2, gène le plus souvent impliqué dans la suscep-tibilité à la MP, code pour une E3 ubiquitine ligase et joue un rôle desuppresseur de tumeur. Ici nous avons étudié son implication dansla susceptibilité et l’oncogenèse du MM. La recherche d’anomaliesde PARK2 et leur fréquence a été réalisée par séquencage, MLPA,qPCR, et CGH chez 512 patients de MM, 570 témoins, 24 lignées de