Test biochimique 2 Test d’utilisation de citrate

Mme hedia BEN ABDALLAH

BTS

Introduction

• Le test d'utilisation de citrate permet de distinguer les genres de la famille des Enterobacteriaceae en fonction de leurs sous-produits du métabolisme.

• L'utilisation de citrate est utilisé pour distinguer les coliformes ( tels que Enterobacter aerogenes (+ ve) qui se trouvent naturellement dans le sol et les eaux) des coliformes fécaux (tels que Escherichia coli (-ve) dont sa présence représente une contamination fécale récente).

• Le test d'utlilisation de citrate est utilisé pour déterminer la capacité des bactéries à utiliser le citrate de sodium comme seule source de carbone .

Principe

Le citrate est un acide organique , utilisé comme source de carbone et d'énergie, se transforme en produits finaux: les carbonates et les bicarbonates alcalins.

L'utilisation du citrate exogène nécessite la présence de protéines de transport de citrate (les perméases).

Lors de l'absorption par la cellule, le citrate est hydrolysé en oxaloacétate et en acétate par le citrate lyase. L'oxaloacétate est converti ensuite en pyruvate et CO2.

Citrate -> oxaloacetate + acétate-> pyruvate + CO2

Principe

Dans les conditions alcalines, le pyruvate est métabolisé en acétate et en acide méthanoique

À pH égal ou inférieur à 7,0 , Le pyruvate est converti en lactate et de l'acétoïne:

pyruvate ->acetate + lactate + CO2

pyruvate ->acetoin + CO2

Le dioxyde de carbone qui est relâché réagit par la suite avec l'eau et l'ion sodium dans le milieu pour produire du carbonate de sodium, un composé alcalin permettant d'augmenter l'alcalinité totale.

En alcanisant le milieu l'indicateur de pH bleu de bromothymol, vire du vert ( ph Neutre) au bleu ph alcalin > 7,6).

Principe

Méthode

• A l’aide d’une pipette pasteur boutonnée prélever la souche à ensemencer à partir d'une culture bactérienne ( de préférence des colonies isolés de 18 à 24 heures).

• Ensemencer par stries ascendants sur la pente sans abimer la gélose.

• Incuber 24 heures à 37°C, bouchon dévissé. • Observer le changement du couleur • NB : certains microorganismes exigent une

période d'incubation allant jusqu'à sept jours,

Lecture

• Positif: Les bactéries utilisent le citrate comme seule source de carbone avec alcalinisation du milieu ( le milieu vire au bleu).

les bactéries sont dites citrate (+)

• Négatif: Présence ou absence de culture bactérienne Milieu reste inchangé (vert)

les bactéries sont dites citrate (-)

• Test d’utilisation de citrate:

• A: Citrate (-)

• B: Citrate (+)